Transwe侵袭实验总结.docVIP

1．Trans?welltrans?-这个词根有?转移、转运、穿过等意思?，well有?小室的意思?，可以从字面?上理解，这是一类有?通透性的杯?状的装置，根据Cor?ning公?司的Tra?nswel?l说明书中?的介绍，可以认为这?是一种膜滤?器（Membr?ane filte?rs），也可认为是?一种有通透?性的支架（perme?able suppo?rts）。更准确地说?，Trans?well应?该是一种实?验技术，这项技术的?主要材料是?Trans?well小?室（Trans?well chamb?er，Trans?well inser?t），其外形为一?个可放置在?孔板里的小?杯子，不同厂家对?Trans?well会?有不同的命?名，而不同型号?也可有不同?形状，不同大小，根据实验需?要，可有不同选?择。 但无论是何?种外形，其关键部分?都是一致的?，那就是杯子?底层的一张?有通透性的?膜，而杯子其余?部分的材料?与普通的孔?板是一样。这层膜带有?微孔，孔径大小有?0.1－12.0μm，根据不同需?要可用不同?材料，一般常用的?是聚碳酸酯?膜（polyc?arbon?ate membr?ane）。下图是一个?Trans?well装?置的纵切面? 将Tran?swell?小室放入培?养板中，小室内称上?室，培养板内称?下室，上室内盛装?上层培养液?，下室内盛装?下层培养液?，上下层培养?液以聚碳酸?酯膜相隔。我们将细胞?种在上室内?，由于聚碳酸?酯膜有通透?性，下层培养液?中的成分可?以影响到上?室内的细胞?，从而可以研?究下层培养?液中的成分?对细胞生长?、运动等的影?响。 应用不同孔?径和经过不?同处理的聚?碳酸酯膜，就可以进行?共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等?多种方面的?研究。当然不同细?胞其体积不?同，具体选择时?要考虑到细?胞大小。这里主要谈?几种大家常?用的实验：（1）共培养体系?：小于3.0um孔径?条件下，细胞不会迁?徙通过，因此，若研究不涉?及细胞运动?能力，不需要细胞?穿过聚碳酸?酯膜，则应选择3?.0μm以下?孔径。常用0.4、3.0μm。我们实验室?用的是0.4μm。将细胞A种?于上室，细胞B种于?下室，可以研究细?胞B分泌或?代谢产生的?物质对细胞?A的影响。  （2）趋化性实验?可用5.0、8.0、12.0μm膜，上室细胞可?穿过聚碳酸?酯膜进入下?室，计数进入下?室的细胞量?可反映下室?成分对上室?细胞的趋化?能力。①细胞B对细?胞A的趋化?作用：将细胞A种?于上室，细胞B种于?下室，可以研究细?胞B分泌或?代谢产生的?物质对细胞?A的趋化作?用。②趋化因子对?细胞的趋化?作用：将细胞种于?上室，下室加入某?种趋化因子?，可研究该趋?化因子对细?胞的趋化作?用。 （3）肿瘤细胞迁?移实验常用8.0、12.0μm膜，上室种肿瘤?细胞，下室加入F?BS或某些?特定的趋化?因子，肿瘤细胞会?向营养成分?高的下室跑?，计数进入下?室的细胞量?可反映肿瘤?细胞的迁移?能力。 （4）肿瘤细胞侵?袭实验常用?8.0、12.0μm膜，原理与肿瘤?细胞迁移实?验类似。 trans?well侵?袭实验，其实原理简?单地说就是?用一层膜将?高营养的培?养液和低营?养的培养液?隔开，细胞放在低?营养的培养?液里，为了找吃的?，细胞会往高?营养的培养?液里面跑，但是有膜挡?着，所以要穿过?膜才行。我们在膜上?涂上一层基?质胶，模仿细胞外?基质，于是细胞要?把基质消化?了才可以从?低营养的培?养液跑到高?营养的培养?液里面，最后我们检?测高营养的?培养液里细?胞量就可以?知道细胞的?侵袭能力了?，大概原理就?是这样的。 2．肿瘤细胞侵?袭模型用于研究肿?瘤细胞侵袭?能力的肿瘤?细胞侵袭模?型有如下几?种（引自司徒镇?强《细胞培养》）：2．1 体内癌细胞?侵袭模型2．1．1 皮下移植侵?袭模型2．1．2 肌肉内移植?侵袭模型2．1．3 腹腔内移植?侵袭模型2．1．4 小鼠肾包膜?下移植侵袭?模型2．1．5 鼠睾丸包膜?下移植侵袭?模型2．1．6 小鼠耳廓皮?下移植侵袭?模型2．1．7 鼠爪垫皮下?移植侵袭模?型2．1．8 视网内界膜?侵袭模型2．2 体外癌细胞?侵袭模型2．2．1 体外静止器?官培养法2．2．1．1 半固体培养?基单细胞器?官培养法2．2．1．2 液体培养基?单细胞器官?培养法2．2．2 半体外半体?内器官培养?法2．2．3 单层细胞器?官培养法2．2．4 瘤细胞球体?器官培养法?2．2．4．1 静止球体器?官培养法2．2．4．2 旋转摇动球?体器官培养?法2．2．5 单层细胞侵?袭实验模型?2．2．6 Trans?well侵?袭小室