三孢布拉霉菌苗丝体中番茄红素超声提取工艺的研究.docVIP

三孢布拉霉菌苗丝体中番茄红素超声提取工艺的研究 　　摘要：目的研究超声波法提取三孢布拉霉菌(Blakeslea trispora)菌丝体中番茄红素的工艺条件。方法研究提取溶剂、料液比及超声波输出功率、间歇工作时间、超声时间对提取效果的影响，通过正交试验，确定最佳工艺条件。结果通过实验得到最佳超声提取工艺条件为：以乙酸乙酯为溶剂，料液比1：100，超声波输出功率400 w，间歇工作时间5 s，5 s，超声提取时间20min，二级提取。在此条件下番茄红素的提取率为89.0％。结论优化了番茄红素的超声提取工艺。 　　关键词：番茄红素；三孢布拉霉；超声 　　中图分类号：Q815 文献标识码：A 文章编号：1672-979X(2010)01-0007-04 　　 　　番茄红素是类胡萝卜素的一种，具有很强的抗氧化性，能高效淬灭单线态氧，清除体内自由基，在食品、化妆品、预防癌症和心血管疾病等方面有着重要的应用。番茄红素不溶于水，难溶于乙醇、甲醇等极性有机溶剂，可溶于乙醚、石油醚、丙酮，易溶于氯仿、苯、二硫化碳等。 　　目前，番茄红素提取方法主要有溶剂浸提法、酶水解法、皂化法、微波提取法、超临界提取法等。应用超声波法提取番茄及番茄酱原料中的番茄红素已有很多报道，但用于提取三孢布拉霉菌菌丝体中番茄红素报道甚少。相对于传统先真空干燥菌丝体后粉碎再有机溶剂浸提的工艺，超声波法不但可加速提取成分的扩散释放，提高番茄红素的提取率，还显著缩短提取时间。 　　 　　 　　 　　本研究主要通过单因素及正交试验寻求有机溶剂超声波破碎提取三孢布拉霉菌菌丝体中番茄红素的最佳工艺条件，为工业化生产提供参考。 　　 　　1　材料与设备 　　 　　1.1材料 　　三孢布拉霉菌菌丝体(本实验室发酵培养)； 　　乙醇、石油醚(沸程60～90℃)、乙酸乙酯、丙酮、正己烷、苏丹I号等均为分析纯。 　　 　　1.2仪器与试剂 　　UV-2100型分光光度计(UNIC公司)；JY92-2Dj~声波细胞破碎仪(宁波新芝生物科技公司)；FAl004电子天平(上海良平仪器公司)：SorvaURC-6Plus高速离心机(ThermoScieaatific公司)。 　　 　　2　实验方法 　　 　　2.1茵丝体预处理 　　发酵后的三孢布拉霉菌菌液12000r／rain离心5 rain,去上清后加入适量乙醇洗涤菌丝体沉淀，6 000 r／min离心5 min，除去乙醇上清并晾干，得三孢布拉霉菌菌丝体。 　　 　　2.2番茄红素提取单因素实验及正交试验 　　称取预处理后的菌丝体0.2 g，置于50 mL的离心管中，加入适量的提取溶剂，25℃条件下超声波破碎提取。选择最佳的提取溶剂，确定料液比、超声功率、超声间歇工作时间、提取时间、提取级数等因素对提取率的影响，通过正交试验，得到最佳提取工艺条件。 　　 　　2.3提取率及提取级数的确定 　　称取预处理后的菌丝体多次超声破碎提取，直到提取液吸光度基本为零，可认为菌丝体中番茄红素全部提取。分别收集各次提取液并测定其体积(V／mL)和吸光度值(A)。分别计算各次提取率 　　提取率(％)=(V×A/∑×A)/100 　　 　　4番茄红素测定方法 　　用提取剂定容2.2项中提取液至50 mL，离心取上清0.5 mL，稀释6倍，以提取剂为参比液，用1ml比色皿在504 ml 100吸光度(此波长可避开菌丝体中其他类胡萝卜素的干扰)，按文献方法计算提取液中番茄红素的量。 　　　3　结果与讨论 　　 　　3.1单因素实验结果 　　3.1.1提取溶剂的选择称取预处理后的菌丝体0.2 g，置于50 mL的离心管中，以1：100(g／mL)分别加入溶剂水、乙醇、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、正己烷，25℃条件下超声波(300 w，5s／s)破碎提取10 min。以对应提取剂为空白，实验结果见表1。 　　结果表明，乙酸乙酯提取效果最佳，丙酮次之，石油醚、正己烷、乙醇、水较差。乙酸乙酯价格便宜，常压下沸点低，利于回收，因此选乙酸乙酯作为提取剂。 　　3.1.2料液比的选择称取预处理后的菌丝体0.2g，置于50 mL的离心管中，加入不同量的乙酸乙酯，使料液比(50 mL)分别为1：50，1：75，1：100，1：125，1：150，1：200，25℃条件下超声波(300w，5 s／5 s)破碎提取10 rain，测吸光度值，实验结果见表2。 　　由表2可见，当料液比为1：100时，提取效果最佳，但随着提取液的增加，提取效果反而下降。可能因为提取液量大时，整体体积过大，超声效果不好；料液比太低时，影响浸提交换速率。综合分析，选择料液比1：100为宜。 　　3.1.3超声波输出功率的确定称取预处理后