荧光原位杂交更新.pptxVIP

简 介原位杂交技术（in situ hybridization，ISH） Gall和Pardue 1969年建立。 用标记的DNA或RNA作为探针，对组织细胞内的核酸或有丝分裂中期的染色体进行原位检测和观察。最初的探针大多以同位素3H、32P等标记，但因同位素标记探针对人体有放射损害、实验周期长、放射自显影的分辨率有限、环境污染等缺点，给研究及实际应用带来了诸多不便。 荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization ，FISH） 利用荧光物质标记探针（直接或间接），再进行杂交，可通过荧光显微镜对靶序列进行定性、定位和定量分析FISH技术的应用已经证实或发现了用经典细胞遗传学方法无法证实或发现的肿瘤染色体改变，成为衔接细胞遗传学和分子遗传学之间的一座桥梁。开创了一个新的学科——分子细胞遗传学。 杂交流程a.两要素： 探针和靶序列b.标记探针 直接标记和间接标记c.变性 探针和靶序列成为单链d.混合杂交e.间接标记的探针需连接荧光基团的步骤荧光标记的DNA探针 （200-500bp）F I S H 荧光原位杂交特点与其它原位杂交技术相比，FISH的优点： ①经济安全，快速方便； ②敏感性高，特异性强，背景低； ③宜于多靶杂交，对同一标本同时进行多个探针杂交，不同的探针可以显示不同的荧光颜色； ④使用G带玻片可作出回顾性分析；缺点： 不能达