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实验二器械的清洗和消毒
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实验2 器械的清洗与消毒
【实验原理】
在组织培养过程中,离体细胞对任何毒性物质都十分敏感。毒性物质包括解体的微生物及细胞残余物以及非营养的化学物质,因此对新采用和重新使用的培养皿等培养用品都要严格清洗和消毒。
【实验目的】
学习并掌握细胞培养使用的器皿、器械的洗涤和消毒。
【仪器、材料及试剂】
1.仪器:超净工作台,干燥箱,高压锅,过滤器。
2.材料:紫外灯,0.22μm微孔滤膜。
3.试剂:75%酒精,0.1%新洁尔灭,高锰酸钾,重铬酸钾,浓硫酸。
【操作步骤】
1.清洗
(1)玻璃器皿的清洗
步骤:按浸泡→刷洗→浸酸→冲洗等四步程序进行。
= 1 \* GB3 ①浸泡:新购进的玻璃器皿常带有灰尘,呈弱碱性,或带有铅、碑等有害物质,故先用自来水浸泡过夜、水洗,然后再用2%~5%盐酸浸泡过夜或煮沸30min,水洗。要领:培养用后的玻璃器皿要立即泡入清水中,使下道刷洗工作能顺利进行。用后的玻璃器皿常带有大量的蛋白质附着,干涸后不易刷洗掉,用后要立即用清水浸泡。
= 2 \* GB3 ②刷洗:用软毛刷、优质洗涤剂,刷去器皿上的杂质,冲洗晾干。要领:浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂去器皿上的杂质、刷洗次太多,会损害器皿的表面光洁度,洗涤剂有使pH上升的趋势,所以易选用软毛刷和优质洗涤剂。禁止用去污粉。因其中含有砂粒。会严重破坏玻璃器皿的光洁度。特别注意刷洗瓶角部位。酸浸之前要把洗涤剂冲干净。
= 3 \* GB3 ③浸酸:将器皿浸泡于清洁液24h,如急用也不得少于4h。清洁液由重铬酸钾、浓硫酸及蒸馏水配制而成,具有很强的氧化作用,去污能力很强。经清洁液浸泡后,玻璃器皿残留的末刷洗掉的微量杂质可被完全清除。
= 4 \* GB3 ④冲洗:先用自来水充分冲洗,吸管等冲流10min,瓶皿需每瓶灌满、倒掉,反复10次以上。然后再经蒸馏水漂洗3次,不留死角。晾干或烘干备用。对已用过的器皿,凡污染者必先经煮沸30min或放3%盐酸中浸泡过夜,未污染者可不需灭菌处理,但仍要刷洗、清洁液浸酸过夜,冲洗等。
【附】清洁液的配制和使用注意事项
清洁液(配方见表2-1)
配方成分
弱酸
次强液
强液
重铬酸钾(g)
清水(ml)
浓硫酸(ml)
硫酸浓度(v/v)
50
1000
90
8%
100
1000
160
14%
60
200
800
80%
= 1 \* GB3 ①选用耐酸塑料桶或不锈钢桶配制为宜。
= 2 \* GB3 ②先将重铬酸钾溶于水(用玻璃棒搅拌助溶,有时不能完全溶解)。
= 3 \* GB3 ③缓缓加入浓硫酸,切忌过急,否则将产热而发生危险(绝不可将重错酸饵液倒入浓硫酸中)。
= 4 \* GB3 ④清洁液配好呈棕红色,待变绿色时表明失效。
由于清洁液的腐蚀性极强,配制与应用时必须小心,并做好防护。
2.矽酸钠洗液
贮存液(×100)
砂酸纳80克加偏磷酸钠9克加热溶在1000ml水中。使用时用水稀释100倍,将器皿放入煮沸20min,冷却后冲洗,再用2%HCl浸泡2h后,自来水冲洗。矽酸钠洗液较清洁液安全,但价格较贵。
(2)塑料器皿清洗
自来水充分浸泡→冲洗→2%Na0H浸泡过夜→自来水冲洗→2%~5%盐酸浸泡30min→自来水冲洗→蒸馏水漂洗3次→晾干→紫外线照射30min(或先用75%酒精浸泡、擦拭,再用紫外线照射30min)。凡能耐热的塑料器皿,最好经101.3kPa(121.3℃)高压灭菌。
(3)胶塞等橡胶类处理
新购置者先经自来水冲洗→2%NaOH煮沸15min→自来水冲洗→2%~5%HCl煮沸15min→自来水冲洗5次以上→蒸馏水冲洗5次以上→蒸馏水煮沸10min,倒掉沸水让余热烘干瓶塞等。或蒸馏水冲洗晾干,整齐摆放于小型金属盒内经101.3kPa高压灭菌。
(4)金属器械的清洗
新购进的金属器械常涂有防锈油,先用沾有汽油的纱布擦去油脂,再用水洗净,最后用酒精棉球擦拭,晾干。用过的金属器械应先以清水煮沸消毒,再擦拭干净。使用前以蒸馏水煮沸10min,或包装好以101.3kPa高压15min。
(5)除菌滤器的处理
用过的滤器将滤膜去除,用三蒸水充分洗净残余液体,置干燥箱中烘干备用。
2.包装
包装的目的是防止消毒灭菌后再次遭受污染,所以经清洗烤干或晾干的器材,应严格包装后再行消毒灭菌处理。包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。包装分为局部包装和全包装两类,前者用于较大瓶皿,一般用硫酸纸和牛皮纸将瓶口包扎好;后者适于较小培养瓶皿、吸管、注射器、金属器械和胶塞等,以下为常用瓶皿、吸管、无菌衣帽等的包装方法,其它物品可参照处理。
= 1 \* GB3 ①瓶类:硫酸纸罩以瓶口,外罩二层牛皮纸用绳扎紧。
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