PD模型细胞中凋亡与自噬的初步研究前言帕金森病（Parkinsons.docVIP

PD模型细胞中凋亡与自噬的初步研究 前言 帕金森病（Parkinson’s disease, PD）是一种最普遍的神经退行性疾病，由英国医生James Parkinson于1817年首先描述。其主要临床特征为当个体静止时肌肉不自主震颤和强直，运动时反应迟缓和姿势难以保持平衡等，主要病理特征为多巴胺能（DA）神经元的选择性缺失和细胞质内含物的积累[1]。帕金森病的病因和发病机制十分复杂，至今仍尚未明确，现在的主流学说认为，疾病的发生主要有3中因素：1，年龄因素：随着个体年龄不断增加，大脑内出现老化现象，黑质致密部（substantia nigra parscompacta，SNpc）多巴胺（dopamine，DA）能神经元数量逐渐减少，因此会导致体内多巴胺的含量下降，当纹状体内的多巴胺含量逐渐减少以致达到80%以上的时候，临床上就会出现帕金森病，所以随年龄增长出现的老化现象是PD一个重要的促发原因。2，环境因素：人类的日常生活中常常因为某种需求而致使环境中出现不利于人体健康的因素，其中某些风险因素可能会与诱发帕金森疾病有关，包括农业应用的杀虫剂和除草剂，建筑工程上应用的化工产品，造纸纸浆等。这些环境因素均可以导致细胞内线粒体功能受阻并发生障碍，进而造成多巴胺能神经元的死亡[2]，进而促使了PD疾病的发生。3，遗传因素：PD的遗传性分为家族性遗传和散发性遗传，其中散发性遗传的PD患者占大多数，主要是由于相关基因的突变。其中与常染色体隐性遗传的基因有4个，分别是PINK1，Parkin，DJ-1和ATP13A2。当这些基因突变时均会导致个体患帕金森病[3]，。因此本课题着重研究其中的一个基因Parkin。 细胞是生命体结构和功能的基本单位。细胞内物质的降解途径主要有两种，一是通过蛋白酶体降解；二是通过细胞自噬来完成。蛋白酶体的降解对象是短寿命的蛋白，而其余的长寿命的蛋白和一些细胞器的降解则是通过细胞自噬来完成降解[4]。 自噬是细胞内的主要降解系统，通过细胞自噬可以将细胞质中的废弃物质运送到溶酶体中完成降解。但是，自噬的目的不是简单的清除废弃物质，而是作为一个动态的回收系统，将废弃物质降解并提取其中可被再利用的小分子，用于细胞蛋白和胞器的更新，为细胞自稳态提供新的物质和能量[5]。 Parkin蛋白的分子量为52KD，由465个氨基酸组成，其氨基酸端与泛素有30%的同源性，为泛素样结构域（Ubiqutin-like domain, UBL ），这便于其引导泛素；羰基端由两侧的指环结构（finger motifs, RING1和RING2）及其中间的半胱氨酸富集区（in-between ring, IBR)组成，并构成（RING）0-RING-Between-RING（RBR）结构[6]，这便于其将引导的泛素连接到底物上。Parkin具有多种多样的结构域，通过这些结构域相互集合结于一体，致使其具有各种各样的功能，并像蛇一样弯曲排列[7]。Parkin属于E3的RBR家族[8]，可以通过指环结构和泛素蛋白连接酶的活性将泛素蛋白连接到底物上。Parkin与泛素蛋白激活酶（ubiquitin-activating enzyme，E1）和泛素蛋白结合酶（ubiquitin-conjugating enzyme,E2）共同作用，可以对细胞内的一些蛋白或细胞器进行泛素化降解，其中包括错误表达的蛋白，错误折叠的蛋白，功能丧失的蛋白，受损的细胞器，老化的蛋白和细胞器。有效避免了由于细胞内因上述蛋白或胞器积累而导致的细胞毒害作用，从而维持了细胞内稳态。 流行病学调查发现，多种环境因素参与了PD的发生和发展。其中鱼藤酮便是一种环境神经毒素，他不需要任何载体的辅助即可穿过血-脑屏障及生物膜，对神经中枢的细胞造成损伤，是一种天然的有机杀虫剂。鱼藤酮通过选择性抑制线粒体氧化呼吸链复合体I，致使胞内ATP生成障碍并产生大量的氧自由基（ROS），导致氧化应激反应，进而损伤线粒体，使得对氧化应激具有高敏感性的黑质纹状体多巴胺系统出现神经退行性变[9]，从而诱发帕金森病。 通常情况下损伤的线粒体通过自噬途径降解，这一过程称为线粒体自噬[10]。目前研究比较明确的是PINK1和Parkin基因突变与线粒体自噬有关[11][12]。PINK1是线粒体外膜激酶，其可以通过磷酸化或激活中间信号蛋白来调节Parkin蛋白的翻译后修饰[13]。Parkin在泛素-蛋白酶体系统（Ubiquitin-proteasome system，UPS）内发挥E3泛素样蛋白连接酶作用，用于将泛素连接到多余或异常的蛋白或细胞器上，指导其降解，起到神经保护作用[14]。因此，Parkin可以与泛素化的线粒体蛋白PINK1相互作用，从细胞质移位至功能受损的线粒体，而促进线粒体的选择性降解。这