亲水的作用色谱―四极杆静电场轨道阱高分辨率质谱快速测定水样中氨基脲.docVIP

亲水的作用色谱―四极杆静电场轨道阱高分辨率质谱快速测定水样中氨基脲 　　摘要建立了亲水作用色谱四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱快速检测水中氨基脲的方法。水样中加入0.1 mol/L NaOH溶液后，以乙腈为提取剂，加入过量Na2SO4，使乙腈与水分层，乙腈提取液再经无水Na2SO4脱水后，采用亲水作用色谱柱Amide色谱柱分离，以0.1%甲酸水溶液及0.1%甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱，四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱电喷雾正离子、选择离子监测模式检测，同位素内标法进行定量分析。在最优实验条件下，氨基脲在 0.2～20 μg/L浓度范围内线性相关系数为0.997，方法的检出限为0.09 μg/L，定量限为0.30 μg/L。以淡水和海水为空白样品，在添加浓度为0.5， 1.0和5.0 μg/kg水平下，氨基脲的加标回收率为 82.3%～92.0% ，相对标准偏差小于7.6%。本方法适用于环境水样中氨基脲的快速分析。 　　关键词 亲水作用色谱； 高分辨质谱； 水样； 氨基脲 　　1引言 　　氨基脲（Semicarbazide，SEM）属于联胺类化合物中的一种，它是一种重要的工业原料，可用于制备热敏记录纸上的光色染料，也用于医药、农药等有机合成的中间体[1]。研究表明， 它不仅具有致诱变性和潜在的致癌性，而且还可对神经系统、内分泌系统的功能产生影响[2，3]。在日常生产活动中多种因素容易导致SEM的产生，如某些含SEM工业废水的排放，食品添加剂偶氮甲酰胺在高温加工条件下分解产生SEM[4，5]，消毒水处理食物产生SEM[6，7]，水产养殖业中非法使用呋喃西林药物在动物体内也可代谢成为SEM[8，9]。由于SEM为水溶性物质，各种途径产生的SEM最终随着环境进入水体，SEM已逐渐成为环境中一种全新的环境污染物[10]。目前，检测SEM的主要方法有胶体金免疫层析法[11]、酶联免疫分析法[12]、高效液相色谱/串联质谱法[8，13，14]等。胶体金免疫层析法和酶联免疫法通常用于样品的快速筛选，方法易受样品基质中类似物质干扰而产生假阳性；最为常用的分析方法为高效液相色谱/串联质谱法，检测的样品基质包括动物组织、婴幼儿食品、甲壳类水产品等。由于SEM分子小、极性强，难以直接进行分析，因此目前所报道的方法通常是先将样品经过2硝基苯甲醛长时间衍生、衍生液经有机溶剂提取、固相萃取柱净化后，再通过反相液相色谱柱分离SEM衍生物，最后以电喷雾质谱进行检测。该方法灵敏度高，能对样品进行确证检测，但也存在样品前处理十分繁琐、耗时长的缺点。由于SEM极性很强，在常规的反相色谱柱上没有保留，质谱检测时受基质背景干扰严重，因此难以采用液相色谱电喷雾质谱方法直接对SEM进行检测。 　　亲水作用色谱技术[15，16]是近年来发展起来的新的分离手段，可以保留一些用反相色谱无法简单保留的碱性化合物，因此可以在不衍生的条件下实现对强极性分子SEM与其它物质的分离。四极杆/静电场轨道阱是一种高分辨质谱技术，能够提供化合物精确分子质量测定， 实现化合物的快速定性与定量分析[17]，非常适于复杂基质中化合物的快速分析，已广泛应用于蛋白质组学、代谢组学和食品安全领域中小分子和大分子的快速测定[18～20]。采用亲水作用色谱高分辨质谱技术直接对SEM进行测定尚未见报道。本研究通过采用亲水作用色谱技术，并结合四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱技术，建立了一种环境水样中SEM的灵敏检测方法，适用于环境水样中痕量SEM污染物的快速分析。 　　2实验部分 　　2.1仪器与试剂 　　QExactive四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪（美国 Thermo Fisher 公司），Dionex UltiMate 3000液相色谱（美国 Thermo Fisher 公司）；XBrige Amide液相色谱柱（150 mm×2.1 mm，3.5 μm，美国Waters公司）。 　　氨基脲盐酸盐和13C15N标记的氨基脲同位素标准品（纯度≥99%， 德国Dr. Ehrenstorfer 公司）；甲醇、乙腈（色谱纯，Merck公司）；甲酸（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）；无水Na2SO4 （分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；NaH2PO4（分析纯，天津市福晨化学试剂厂）；实验用水由MilliQ 纯水仪制备。 　　2.2标准溶液的配制 　　SEM标准储备液配制：准确称取2.0 mg SEM盐酸盐标准品，用甲醇溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，即得200 mg/L的标准储备液， 　　Symbolm@@ 18℃保存。SEM同位素内标储备液配制：准确称取2.0 mg SEM同位素内标标准品，用甲醇溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，即得200 mg/L 内标标准储备液， Sy