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PAGE PAGE 2 实验6 小动物脑立体定位技术 一、实验目的 1. 了解脑立体定位技术。 2. 掌握脑立体定位仪及脑图谱的使用方法。 二、实验原理 脑立体定位技术被广泛的运用于脑的损毁、刺激和脑电记录的精确定位中，成为研究脑结构和功能必不可少的工具。脑立体定位技术主要是使用脑立体定位仪作为定位仪器，利用某些颅骨外面的标志（如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢状缝等）或其它参考点所规定的三度坐标系统，来确定皮层下某些神经结构的位置，以便在非直视暴露下对其进行定向的刺激、破坏、注射药物、引导电位等研究，是神经解剖、神经生理、神经药理和神经外科等领域内的重要研究方法。常用的实验动物，如大鼠、小鼠、猫等高等哺乳动物以及鸟类，其均有完全的外耳道，可用（耳棒）来定位。在确定了颅外标记之后，就可按脑立体定位图谱所提供的数据进行定位操作。 三、实验器材 江湾-Ⅰ型脑立体定位仪，MC-5微操作仪，常规手术器械，钻孔针，纱布，干棉球，酒精，0.4%戊巴比妥钠（麻醉剂，现配现用），生理盐水，1ml注射器，3%双氧水， 小白鼠。 四、实验步骤 1. 江湾Ⅰ型脑定位仪的使用 1.1 校验仪器 定位仪经过搬动或长期不用后，使用前需先加以校验。重点是检验电极移动架各滑尺是否保持直角，可用三角板测定各滑尺所成的角度是否是直角；各衔接部与螺丝有没有松动；滑尺是否太松；检查主框两臂的平行情况；最后观察固定头的装置两侧对称程度，小框是否与主框平行。检查仪器无故障后，可进行下列校验性操作： （1）将两侧耳杆柱旋松，在主框上前后滑动，然后再按照原规定刻度装好，看两侧耳杆尖是否完全对正。 （2）取下一侧耳杆，将一侧电极移动架装好，前后左右上下移动各滑尺，使装在电极夹上的金属定位针尖正对耳杆尖的中心，记下各滑尺的刻度读数，再卸下移动架再装上，并按上法测定耳杆尖的部位，记下三个滑尺的读数，反复操作取平均数首先将放置水平的脑立体定位仪上的两个滑道，按实验的要求调节好合适的高度后。 （3）然后再用水平尺调正好两个滑道的前后、左右水平。这时再把安置在滑道上的手动微推进器按上面的刻度调节垂直。 1.2 确定脑立体定位零点，小鼠脑定位的系统大致分两种： （1） 用耳间线中心定位，首先将两个耳棒尖端在定位仪滑道中间部位彼此相接触（两个耳棒读数相同），旋紧镙丝。然后取下一侧耳棒，另一耳棒不动。调节移动推进器，使校验电极尖端与耳棒尖端的中心点相触，即为A点（即耳间线中心点），并记下刻度值。然后，将推进器水平移动到门齿钩的上方，将门齿钩平面与校验电极尖端相触。这时就定出外耳道中心点与门齿牙板上面上沿之间的水平切面0点，记为H0。这时，动物的前囟和后囟基本处在一个水平面上，相差0-0.1mm。另外，规定耳间线中心点以上为+，向下为-；向嘴侧为+，向尾侧为-。 （2）用颅骨标志定位（常用前囟），即以前囟为嘴尾侧0点，由前囟向嘴侧为+，向尾侧为-，其它与上面定位方法相同（图示）。 2. 实验内容 （1）动物麻醉：小鼠，体重20-30g，称重后以0.4%戊巴比妥钠腹腔麻醉注射时必须缓慢，随时注意动物状态。 （2）小鼠头部固定：将小鼠的门齿固定于脑定位仪上颌固定器，然后把一侧的耳捧推入动物的外道后，使动物的头在处于两滑道正中。再将另一耳捧推入另一侧的外耳道。这时观察两个耳棒的刻度一致后，将两耳棒上的固定螺丝扭紧，在将牙齿固定器上压鼻环压下后扭紧（鼻环、耳棒的松紧度调节适宜为好），这时从各个方向推压动物头部均不会出现移动。 （3）开颅钻孔前的备皮：剪去动物头部毛，用2%碘酒及75%酒精棉球作头部皮肤的消毒，沿矢状缝作一3cm长的皮肤切口，分离皮下组织，用双氧水清洁颅骨表面的筋膜及肌肉并剥离，推开骨膜，暴露前囟、人字缝及矢状缝。 （4）确定标准中线：将金属定位针向下移动到矢状缝上方后，再前后移动定位针，使定位针定位到前囟。 （5）小鼠海马定位：用定位针在前囟后2mm, 矢状缝旁开2.5mm处定位一点，即为海马的平面位置，然后在此点上用钻孔针在颅骨上钻一小圆孔。 （6）注射药物：小鼠海马则位于该圆孔下2 mm，将1ml注射器吸入药物安置到MC-5微操作仪上，操作仪器使注射器针头由小鼠脑钻孔处下降2mm时完成药物注射到小鼠脑海马处。 （7）制作脑组织切片：将小鼠脑制作成切片，显微观察小鼠脑中红染料位置来验证小鼠脑海马中是否定位准确。