表达人源ntcp的小鼠肝细胞限制hbv的生活史-生物学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 I I PAGE PAGE IV 摘 要 近来的研究表明，人类钠离子牛簧胆酸共转运蛋白（NTCP 或 SLC10A1） 是乙型肝炎病毒（HBV）的一个功能性细胞膜受体。体外的过表达以及敲低实 验都证明了 NTCP 能够介导 HBV 或者包裹了 HBV 外膜蛋白的丁型肝炎病毒 （HDV）对人肝细胞的特异性侵染；这一功能也在其他一些物种的肝炎病毒及 其对应的宿主细胞上得到验证。然而，NTCP 是否能够介导 HBV 感染小鼠肝细 胞的问题仍然没有答案。由于缺少可用的 HBV 敏感小鼠模型，HBV 在预防和治 疗等领域的研究均受到了极大地限制。因此，研究 NTCP 是否能够支持小鼠肝 细胞对 HBV 感染具有敏感性具有重大的意义。 本论文的数据揭示了小鼠 NTCP 对 HBV 侵染支持性上的缺陷阻止了病毒在 小鼠肝细胞中的感染；然而，尽管人 NTCP 能够支持包裹了 HBV 外膜蛋白的 HDV 在人与小鼠肝细胞系 HepG2、AML-12、Huh7 和 Hepa1-6 中的感染和增殖， 只有外源表达人 NTCP 的人肝细胞系 HepG2 和 AML-12 具有对 HBV 的敏感性， 而小鼠肝细胞 Huh7、Hepa1-6 以及原代肝细胞都不能单纯地通过表达人 NTCP 获得对 HBV 完整生活史的支持能力。由此推论，人 NTCP 能够支持 HBV 感染 人肝细胞，却无法介导小鼠肝细胞对 HBV 的敏感性。后续的实验结果表明，HBV 无法感染小鼠肝细胞不仅因为小鼠 NTCP 无法介导病毒进入细胞膜，小鼠肝细 胞在 HBV 进入细胞膜后同样不能支持病毒的扩增。通过外源导入的 HBV 基因 组能够产生病毒的实验证明了小鼠肝细胞支持 HBV 基因组整合后的增殖步骤； 而转入人肝细胞因子抑或是抑制细胞固有免疫都不能使小鼠肝细胞获得对 HBV 侵染的敏感性。由此，在小鼠肝细胞中仍然还有未知的 HBV 感染限制因素存在， 只有鉴定和消除限制因素才有可能最终建立 HBV 敏感的小鼠模型。 关键词 ： 乙 型 肝 炎 病 毒 钠 离 子 牛 簧 胆 酸 共 转 运 蛋 白 小 鼠 肝 细 胞 HBV 敏感小鼠模型 Abstract Abstract Recent studies have revealed that human sodium taurocholate cotransporting polypeptide (SLC10A1 or NTCP) is a functional cellular receptor for hepatitis B virus (HBV). However, whether human NTCP can support HBV infection inmouse hepatocyte cell lines has not been clarified. Because an HBV-permissible mouse model would be helpful for thestudy of HBV pathogenesis, it is necessary to investigate whether human NTCP supports the susceptibility of mousehepatocyte cell lines to HBV. The results show that exogenous human NTCP expression can render non-susceptible HepG2(human), Huh7 (human), Hepa1–6 (mouse), AML-12 (mouse) cell lines and primary mouse hepatocyte (PMH) cellssusceptible to hepatitis D virus (HDV) which employs HBV envelope proteins. However, human NTCP could only introduceHBV susceptibility in human-derived HepG2 and Huh7 cells, but not in mouse-derived Hepa1–6, AML-12 or PMH cells.These data suggest that although human NTCP is a functional receptor that mediates HBV infection in human cells, itcannot support HBV infection in mouse