05-分子发光分析.ppt

2、 溶剂效应： ? 溶剂极性可增加或降低荧光强度（改变?—?*及 n—?* 跃迁的能量）； ? 与溶剂作用从而改变荧光物质结构来增加或降低荧光强度。 3、 温度：温度增加，荧光强度下降（因为内、外转换增加、粘度 或“刚性”降低）。因此体系降低温度可增加荧光分析灵敏度。 4、 pH值：具酸或碱性基团的有机物质，在不同pH值时，结构不同； pH值会影响无机荧光物质稳定性。 5、 内滤光和自吸： 体系内存在可以吸收荧光的物质称为内滤光； 当荧光物质浓度较大时，可吸收自身的荧光发射称为荧光自吸。 6、荧光猝灭： 第一单色器 或滤光片 记录仪 第二单色器 或滤光片 荧光 光源 激发 样品池 荧光分析仪 1）光源：氙灯、高压汞灯、激光； 2）样品池：石英（低荧光材料）； 氙灯 3）两个单色器：选择激发光单色器；分离荧光单色器； 4）检测器：光电倍增管。 光电倍增管 荧光分析的特点： 灵敏度高：视不同物质，检测下限在0.1~0.001?g/mL之间。可见比UV-Vis的灵敏度高得多！WHY？ 选择性好：可同时用激发光谱和荧光发射光谱定性。 结构信息量多：包括物质激发光谱、发射光谱、光强、荧光量 子效率、荧光寿命等。 应用不广泛：主要是因为能发荧光的物质不具普遍性、增强荧光的方法有限、外界环境对荧光量子效率影响大、干扰测量的因素较多。 1. 磷光的特点： ? 磷光波长比荧光的长(T1S1)； ? 磷光寿命比荧光的长(磷光为禁阻跃迁产生，速率常数小)； ? 磷光寿命和强度对重原子和氧敏感(自旋轨道耦合，使kISC增加)。 2. 低温磷光（液氮） 磷光寿命长，T1的非辐射跃迁几率增加，碰撞失活的几率、光化学反应几率都增加。 必须在低温下测量磷光。 溶剂要求： ?易提纯且在分析波长区无强吸收和发射； ? 低温下形成具足够粘度的透明的刚性玻璃体。 常用的溶剂： ? EPA——乙醇+异戊烷+二乙醚（2+2+5） ?IEPA——CH3I+EPA（1+10）。 3. 室温磷光 低温荧光需低温实验装置且受到溶剂选择的限制，1974年后发展了室温磷光（RTP）。 1）固体基质：在室温下以固体基质（如纤维素等）吸附磷光体， 增加分子刚性、减少三重态猝灭等非辐射跃迁。 2）胶束增稳：利用表面活性剂在临界浓度形成具多相性的胶束， 改变磷光体的微环境、增加定向约束力，从而减小内转换和碰撞等去活化的几率，提高三重态的稳定性。 利用胶束增稳、重原子效应和溶液除氧是该法的三要素。 3）敏化磷光：其过程可以简单表示为： 4.磷光仪器 在荧光仪样品池上增加磷光配件：低温杜瓦瓶和斩光片。 斩光片的作用是利用其分子受激所产生的荧光与磷光的寿命不同获取磷光辐射。 一、概述 1、化学发光： 由化学反应产生能量，吸收了化学反应能的原子或分子由激发态回到基态是产生的光辐射现象叫化学发光。 根据化学发光的强度测定物质的含量的方法叫化学发光分析。 2、化学发光分析的特点： 化学发光反应 A + B? C* + D C* ? C + h? 化学发光效率?cl ： ?cl =发射光子的分子数 / 参加反应的分子数= ?ce??em 二、化学发光分析的基本原理 化学发光反应的发光强度Icl以单位时间内发射的光子数表示。它与化学发光反应的速率有关，而反应速率又与反应分子浓度有关。即 Icl （t）= ?cl ? dc/dt 二、化学发光分析的基本原理 三、化学发光的类型 （1）气相化学发光 主要有O3、NO、S的化学发光反应，可用于监测空气中的O3、NO、SO2、H2S、CO、NO2等。 臭氧与乙烯的化学发光反应； 一氧化氮与臭氧的化学发光反应。 三、化学发光的类型 （2）液相化学发光 用于此类化学发光分析的发光物质有鲁米诺、光泽碱、洛粉碱等。例如，利用发光物质鲁米诺，可测定痕量的H2O2以及Cu、Mn、Co、V、Fe、Cr、Ce等金属离子。 鲁米诺 鲁米诺 四、化学发光的测量装置 样品室 光检测器 放大器 信号输出装置 反应容器 光电倍增管 分子荧光、磷光和化学发光的产生机理； 激发光谱和发射光谱特征。 荧光与分子结构的关系以及溶液的荧光（磷光）强度影响因素。 荧光分析法的特点及定量测定方法。 荧光和化学发光分析仪器的结构。 荧光分析：P98 表5.4、表5.5 生物发光：P105 用于测定ATP或ATP参与的反应。用于细菌污染的快速检测。可口可乐公司将该方法用于饮料装瓶前的