山梨醇对李果肉组织总RNA提取的影响.doc

山梨醇对李果肉组织总RNA提取的影响 390江苏农业(JiangsuofAgr.Sci.),2010,26(2):390～394 徐秋红,章镇,佟兆国,等.山梨醇对李果肉组织总RNA提取的影响[J].江苏农业,2010,26(2):390-394 山梨醇对李果肉组织总RNA提取的影响 徐秋红,章镇,佟兆国,高志红,渠慎春,乔玉山 (南京农业大学园艺学院,江苏南京210095) 摘要:探讨了不同浓度的山梨醇清洗溶液对李果肉组织中RNA提取效果的影响.经琼脂糖凝胶电泳,核酸 蛋白分析仪和RT.PCR等方法对RNA质量和产率进行了分析,结果表明:李果肉组织研磨后用山梨醇清洗溶液处 理有利于总RNA的提取,而不添加山梨醇的清洗溶液,提取液中检测不到RNA,当清洗溶液中山梨醇浓度为1.10 mo]/L时,李果肉组织总RNA的产率明显高于山梨醇浓度为0.35mol/L和3.00mol/L时的产率;以不同贮藏天数 的李果实为试材提取总RNA,其结果是一致的;通过RT.PCR扩增蛋白延伸因子EF-2基因,结果证明本试验提取 的总RNA可以用于基因转录表达特性分析. 关键词:李;果肉;山梨醇;总RNA 中图分类号:s662.3文献标识码:A文章编号:1000d440(2010)02-0390-05 EctofSorbitolonTotaIRNAIsolationfromPlumFruitFlesh XUQiu—hong,ZHANGZhen,TONGZhao-guo,GAOZhi—hong,QUShen-chun,QIAOYu-shan (CollegeofHorticulture,NangAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China) Abstract:TheeffectsofsorbitolwashingbufferontotalRNAisolationfromplumfruitfleshwereinvestigated.The qualityandyieldoftotalRNAweretestedbyagarosegelelectrophoresis,nucleicacid/proteinanalysisandRT?PCRassay. TheresultsshowedthatsorbitolwashelpfulfortotalRNAisolationfromplumfruitflesh.Whenthesorbitolconcentrationin sorbitolbufferwas1.10moUL,theyieldoftotalRNAwasobviouslyhigher,butthetotalRNAcouldntbedetectedwith- outsorbitolinwashingbuffer.TheresultsoftotalRNAextractionexperimentwereconsistentwithpearfruitatdifferent postharveststoragestages.Basedonsuccessfulamplificationofproteinelongationfactor2(EF-2)gene,itWassuggestthat totalRNAisolatedbythismethodcouldbeusedforgeneexpressionanalysisbyreversetranscription?-polymerasechainreac?? tion(RT-PCR). Keywords:plum;fruitflesh;sorbitol;RNAisolation RNA提取是进行基因克隆和RT—PCR分析等 分子生物学研究的前提和基础.植物果实特别是肉 收稿日期:2009-06-24 基金项目:江苏省高技术研究项目(BG2006313) 作者简介:徐秋红(1982一),女,山东淄博人,硕士研究生,从事果树生 物技术研究.(Te1)025(Email)qiuhong8:227@ 163.con 通讯作者:乔玉山,(Te1)025(E-mail)qiaoyushan@njau. edu.en 质果实和成熟果实富含多糖,多酚以及其他的次生 代谢物质…,这些物质对RNA的提取造成较大的干 扰,因此从果肉组织中提取RNA存在一定的困难. CTAB裂解法是一种能够适合富含多糖,多酚等植 物次生代谢物质的果实组织中总RNA提取的方 法引.但由于这些次生代谢物质的干扰,经常会 造成提取失败或提取的RNA质量和产率不高.山 梨醇作为渗透压稳定剂可以调节细胞渗透压,在清 洗溶液中添加一定浓度的山梨醇,在去除多糖,多酚 徐秋红等:山梨醇对李果肉