HPLC色谱条件的优化与色谱教学讲义.pptVIP

● 色谱柱 以硅胶为基质的填料，其使用温 度一般不超过60℃；HTLC使用以氧化锆、 多孔石墨碳、高分子微球为基质的填料或采 用多配位基有机硅胶为填料。 2、pH 引入次级化学平衡（电离、络合、 离子对等）改变溶质的浓度或存在形式，用 以提高选择性。 3、柱外效应 UPLC的技术要求 V池＜0.1 V柱（2—5ul） V管路＜0.1 V柱（0.1mm,id） V进样＜0.15V峰（2—5ul） tC＜0.1tR（10—15S，自动进样器） V死＜0.3ml 死体积的影响 ● 延迟出峰时间 ● 减低柱效 ● 使梯度曲线变形 四、UPLC（UFLC）的评估 1、优势： ● 柱效高 ● 运行时间短 ● 适用于高通量筛选 ● 便于与MS联用 2、短处： ●高柱压降（泵，摩擦生热导致柱效下降和选择性变化） ●色谱成分残留 ●进样器交叉污染 ●供试液需径0.2u滤膜过滤 ●可选色谱柱有限 ●不太适合生物学基质样品 ●不适用于常规质量控制 ●尚未通过GLP认证 3、综合评估 a）结合效率和成本考虑，在不少情况下2u 的填料未必比3u的填料有太多的优势 b）采用亚-2um填料时应考虑： ● 使用现