生物样品制样技术.docVIP

第三讲生物样品制样技术第八章超薄切片技术第九章负染色技术第十章临界点干燥技术第十一章冷冻制样技术第十二章细胞化学技术第八章超薄切片技术超薄切片技术是电镜生物样品制备方法中最基本的常规制样技术。一方面透射电镜其他一些制备技术如细胞化学技术及免疫电镜技术等最终都必须进行超薄切片另一方面超薄切片所显示的生物样品的微细结构也是识别扫描电镜图像、冷冻蚀刻复型及其他电镜图像的基础。取材快速而准确的切取动物或植物组织注意做好一切操作记录。细切在预冷冻的固定液中用锋利刀片将取下的组织切成1立方毫米的小块。前固定用醛类固定液固定组织几小时使细胞生命活动立即停止并使其精细结构得以良好保存。清洗①缓冲液清洗组织几小时中间换液数次。后固定用锇酸后固定组织时间一般不超过2小时。清洗②缓冲液清洗组织半小时以上。脱水丙酮或乙醇系列脱水每级515分钟。浸透环氧丙烷浸透1530分钟包埋剂浸透几小时或过夜。包埋用包埋剂包埋样品而后聚合60℃下2436小时。切片用超薄切片机对样品进行切片染色醋酸铀染色3045分钟柠檬酸铅染色30分钟。超薄切片技术制样过程为了图像清晰超薄切片的要求1细胞的超微结构得到良好的保存没有人工假象2切片厚度一般为50nm500??左右较薄的切片分辨力较高但反差较弱而较厚的切片反差虽好但分辨力则稍差3切片的包埋介质不变形、不分解、不升华可耐受电子束的照射4切片平展均匀没有刀痕、皱褶、震颤