谷氨酸棒状杆菌合成氨基乙酰丙酸的途径构建与-生物技术通报.PDF

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2017, 33 1 :148-156 谷氨酸棒状杆菌合成 5- 氨基乙酰丙酸的途径构建与 发酵优化 1，3 1，3 2，3 1，3 2，3 2，3 饶德明   张良程   陈久洲   孙德虎   孙村民   郑小梅     2，3 1 郑平   刁爱坡  （1. 天津科技大学生物工程学院，天津 300457 ；2. 中国科学院系统微生物工程重点实验室，天津 300308 ； 3. 中国科学院天津工业生物技术研究所，天津 300308） 摘 要 ： 5- 氨基乙酰丙酸 （5-amino levulinic acid，ALA）是生物体内天然存在的一种非蛋白质氨基酸，在农业和医药等领域 应用广泛。为了在谷氨酸棒状杆菌中建立ALA 碳四合成途径并优化其发酵体系，首先在谷氨酸棒状杆菌中过表达沼泽红假单胞菌 来源的ALA 合成酶 （ALAS），建立高效的ALA 碳四合成途径，然后从不同发酵培养基的比较、诱导剂和底物甘氨酸的浓度以及初 始接种量等不同方面对ALA 摇瓶发酵工艺进行了优化。结果显示，过表达HemA 的13032/pZWA1 菌株 ALA 产量达到1.41 g/L，是 对照菌株的67.14 倍。ALA 的最优摇瓶发酵条件为以酵母粉为氮源的M9 培养基，采用5% 的接种量0.1 mmol/L IPTG 进行HemA 的诱导表达，体系中甘氨酸的浓度要控制在4 g/L，摇瓶中ALA 产量可达到3.28 g/L， 比优化前提高了132.62%。采用发酵优化的 条件，在5 L 发酵罐的放大发酵中ALA 产量可达10.08 g/L，这是现有报道中谷氨酸棒状杆菌一步发酵合成ALA 的最高产量。 关键词 ： 5- 氨基乙酰丙酸 ；谷氨酸棒状杆菌 ；5- 氨基乙酰丙酸合成酶 ；沼泽红假单胞菌；发酵优化 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2017.01.017 - Construction of 5 aminolevulinic Acid Synthesis Pathway and Optimization of Fermentation by Corynebacterium glutamicum RAO De-ming1，3 ZHANG Liang-cheng1，3 CHEN Jiu-zhou2，3 SUN De-hu1，3 SUN Cun-min2，3 2，3 2，3 1 ZHENG Xiao-mei ZHENG Ping DIAO Ai-po （1. School of Biological Engineering ，Tianjin University of Science and Technology ，Tianjin 300457 ；2. Key Laboratory of Syst