QF-PCR在5358例地中海贫血产前诊断中对常见染色体病的诊断价值.DOCVIP

QF-PCR在5 358例地中海贫血产前诊断中对常见染色体病的诊断价值 麦明琴 熊盈 周伟宁 黄伟伟 秦丹卿 张琪 （广东省妇幼保健院医学遗传中心 广州511442） 摘要：目的：研究荧光定量PCR（Quantitative Fluorescent Polymerase Chain Reaction，QF-PCR）技术在地中海贫血（简称地贫）产前诊断病例中对常见非整倍体染色体的检测作用，了解此方法的运用对地中海贫血产前诊断，同时快速排除胎儿常见染色体病的诊断价值。方法：回顾分析2015年1月~2017年1月因夫妇双方为同型地贫在我院医学遗传中心行介入性产前诊断（取样标本包括绒毛、羊水与脐血）检测胎儿地贫基因，同时行QF-PCR快速诊断常见染色体数目异常的5 358例产前诊断结果。总结常见非整倍体染色体病在这组人群的检出率，QF-PCR异常而地贫基因正常或轻型的病例再次行胎儿染色体核型分析验证。结果：5 358例地贫产前诊断标本中,所有样本均同时行QF-PCR检测，选用STR（Short Tandem Repeat，STR）位点排查胎儿常见染色体非整倍体异常（13、18、21、X与Y染色体），共检测出染色体异常占0.47%（25/5 358），其中4例合并重型地贫，胎儿引产未行染色体核型分析，其余21例均行染色体核型分析确诊结果一致。结论：QF-PCR技术定量分析STR多态性位点能准确、快速诊断常见非整倍体染色体病，是产前诊断中不可缺少的重要检验方法，在常规地贫产前诊断病例中运用能避免漏诊染色体异常胎儿。 关键词：地中海贫血；荧光定量PCR；产前诊断；染色体非整倍体 中图分类:R714.55 文献标识码：B QF-PCR技术是在PCR扩增和毛细管电泳分离技术基础上，通过定性、定量分析STR的多态性，诊断常见染色体非整倍体。目前能诊断的目标染色体为21、18、13、X和Y 5种，诊断准确率为99.2%~100.0%。该技术由Adinolfi等于1995年建立[1]。随着产前诊断需求的不断上升，QF-PCR技术凸显出来的快速、准确、不需要细胞培养、自动化程度高等特点在产前诊断中有很大的应用价值[2]，对地贫产前诊断病例同时行QF-PCR检测，可减少漏诊常见染色体病。地中海贫血是世界范围内最常见的常染色体隐性遗传病，主要发病机制是由于珠蛋白基因缺陷导致血红蛋白珠蛋白合成障碍或减少。地中海沿岸、东南亚、印度、中东及我国南方地区高发[3]。一项针对广东地区26 543例个体的地贫基线调查显示地贫基因携带率是16.83%，其中α、β地贫的携带率分别是12.96%和4.51%，同型夫妇携带率1.87%[4]。我院产前诊断中心承担了广东省全省重要的地贫防控工作，每年有大量的地贫产前诊断病例，其中大多数来源于基层转诊。快速、准确的产前诊断是防止出现重型地贫患儿的重要措施。本文统计了2015年1月~2017年1月在我中心行地贫产前诊断的5 358例诊断结果，其中胎儿重型及中间型地贫的检出率是20.1%（1 079/5 358)，联合QF-PCR快速诊断常见染色体非整倍体，染色体异常的检出率是0.47%（25/5 358）。现具体分析如下： 1 研究对象和方法 1.1 研究对象 选取2015年~2017年在我院医学遗传中心因夫妇双方为同型地中海贫血携带者而前来行介入性产前诊断手术、诊断胎儿地贫基因类型的病例5 358例，所有取样均同时行QF-PCR分析STR多态性排除常见染色体非整倍体。 1.2 方法 1.2.1 产前诊断样本取样 根据孕妇就诊孕周，采用绒毛活检术、羊膜腔羊水穿刺术、脐静脉穿刺术三种介入性产前诊断方法。排除穿刺的禁忌症后，孕11~14周适宜行绒毛活检术，16周后采取羊膜腔穿刺术，晚孕亦可采用胎儿脐静脉穿刺取样术。所有受检胎儿术前行超声检查，了解胎儿发育情况、羊水量、胎盘位置等信息，绒毛穿刺术前常规超声胎儿颈项透明层厚度（Nuchal Translucency Thickness，NT）检查排除严重发育异常。 1.2.2 送检样本量 地贫基因与QF-PCR检测所需标本的含量，绒毛需取样2 mg，羊水取样15 ml，脐血标本需0.5 ml。 1.2.3 实验仪器与方法 配备毛细管电泳仪、PCR扩增仪，QF-PCR技术检测STR位点诊断常见染色体非整倍体13、18、21、X和Y。采用跨越断裂点多聚酶链反应Gap-PCR技术和反向斑点杂交RDB-PCR（Reverse Dot Blot，RDB）技术，分别检测6种常见α基因缺失与点突变及17种常见β点突变。染色体细胞培养方法分别是：根据取样标本不同，分别采用羊水原位细胞培