低温胁迫下短枝木麻黄耐寒相关基因的差异表达分析-林业科学.PDF

第 53 卷 第 7 期 林 业 科 学 Vol. 53 ，No. 7 2 0 1 7 年 7 月 SCIENTIA SILVAE SINICAE Jul ． ，2 0 1 7 doi :10 ．11707 / j ．100 1-7488 ．20 170707 低温胁迫下 短枝木麻黄耐寒相关基因的 差异表达分析* 李 楠1 ，2 郑 勇奇1 丁红梅3 柳新红2 盛炜彤1 江 波2 李海波2 (1． 中 国林业科学研究院林业研究 所 国家林业局 林木培育重点实验 室 北 京 10009 1 ; 2 ． 浙江 省林业科学研究 院 杭 州 3 10023 ; 3 ． 浙江 中医药大学 杭 州 3 10053 ) 摘 要: 【目的】对 6 个耐 寒 相 关调控 基因( RAP2.7 ，ABR1 ，A tHSFA6B ，A tbZIP44 ，GRX C6 和 HSP18. 2 ) 在 耐 寒 和不 耐 寒 木 麻 黄 种 质 中精 细表达 模式 进行 分析，为 深 入 解 析木 麻 黄 耐 寒 的分子 机制 提 供 理 论 基 础。【方 法 】 测 定 耐 寒 (ZS7 ) 和不耐 寒 (HN1)2 种 短 枝 木 麻 黄 无 性 系在 － 2 ～ － 11 ℃ 低 温 胁迫下 的相 对 电导率 ，基于 Logistic 方程对处理 温 度 和对应 的相 对 电导率进行拟合 ，计算 低 温 半致 死温 度 (LT50 ) 。根 据 前 期 转录组测序得 到 的 6 个耐 寒 相 关调 控 基因的 EST 序列 设计特 异 引物 ，利用 逆 转录 实 时荧 光 定量 PCR 分析 6 个 基因在 － 2 ，－ 5 ，－ 8 ℃ 连 续 3 个 温 度 梯 度 胁迫下 的表达 差异 ，以及在 － 5 ℃ 低 温 下连 续胁迫 1 ，2 ，5 ，8 ，16 ，24 ，48 ，72 h 后 ，在耐 寒 和不耐 寒短 枝 木 麻 黄 无 性 系 中 的精 细表达 模式 。基因相 对表达量 的计算 采 用 2 － ΔΔ C T 法。【结果 】 在低 温 胁迫下 ，耐 寒 和 不 耐 寒 短 枝 木 麻 黄 无 性 系 的相 对 电导率存 在 极 显著差异 (P ＜ 0. 0 1) ，低 温 半 致 死 温 度 分 别 为 － 5. 92 ℃ 和 － 2. 87 ℃ 。在常 温 条 件 下 ，6 个 基因在 耐 寒 和不耐 寒 种 质 中 的相 对 表 达 量 皆无 明显 差 异 。在 临近 不 耐 寒 种 质 半 致 死 温 度 的 － 2 ℃ 下 持 续 2 h 后 ，6 个耐 寒 相 关基因在 不耐 寒 种 质 中 的表达 被 强 烈抑制 ，而 在 耐 寒 种 质 中 的表达 被 激活 ; 在临近 耐 寒 种 质半 致 死 温 度 的 － 5 ℃ 下 持 续 2 h 后 ，不耐 寒 种 质 中 的各 基因 被 进 一步抑制 ，同时在 耐 寒 种 质 中 的表达 亦 被 强 烈 抑制 ; 在低 于 半致 死温 度 的 － 8 ℃ 下 持 续 2 h 后 ，各 基因的 表 达 继 续 受 到 抑 制 。对 在 临近 耐 寒 种 质 半 致 死 温 度 的 － 5 ℃ 胁 迫 下 ，耐 寒 种 质 和不耐 寒 种 质 的精 细表达 模式 分析表 明，在 － 5 ℃ 低 温 胁迫 下 ，耐 寒 种 质 中 6 个 基 因 的 表 达 在