产植酸酶枯草芽孢杆菌的选育及其棉粕源发酵产物的研究-动物营养与饲料科学专业论文.docxVIP

Study on Breeding of Phytase- producing Baaaacccciiiilllllllluuuussssssssuuuubbbbttttiiiilllliiiissssaaaannnndddd iiiittttssss fermentation products from cottonseed meal source A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Agriculture By Zhen－Guo Bao （Animal Nutrition and Feed Science） Dissertation Supervisor: Prof. Wen－Ju Zhang June，2013 Shihezi, Xinjiang, China II 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果.据我所知，除 文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果.对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意. 研究生签名:钝卒 f 时间: 训;年 6 月 6 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主 管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。 有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编 出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 研生签名:诙称 I 时间:μtJ年 6 月 〈日 时间:时年 j 月 6 日 I I 摘要 目的：本研究通过对枯草芽孢杆菌进行诱变处理，选育出一株产植酸酶的枯草芽孢杆菌，并确定 最优诱变方式。采用 4 因子 5 水平正交设计和 2 因子 5 水平正交设计，以发酵产物中枯草芽孢杆菌 数量和植酸酶的活性为指标，优化枯草芽孢杆菌的 发酵饲料参数和底物组成、接种量，最终确定枯 草芽孢杆菌发酵饲料发酵工艺参数，为生产优质生物发酵饲料奠定基础；探究植酸酶对棉粕中植酸 的降解水平，同时对棉粕源发酵产物进行营养价值的综合评定。本论文的目的是将枯草芽孢杆菌培 养物的生物学特性与新疆丰富棉粕资源优势有机地结合起来，开发棉粕源枯草芽孢杆菌发酵饲料， 应用于动物生产，促进动物生长、保障动物健康、提高饲料利用效率。 方法：本论文由三个试验组成。试验一：筛选产植酸酶枯草芽孢杆菌，然后采用紫外线（UV）、 亚硝基胍（NTG）、UV－NTG、NTG－UV 四种方法对其进行诱变，确定最佳诱变方式及诱变条件。 试验二：采用 4 因子 5 水平正交设计，从发酵温度（29℃、33℃、37℃、41℃、45℃），时间周期 （12h、24h、48h、72h、96h）、底物初始水分（30%、40%、50%、60%、70%）、底物初始 pH（6.0、 6.5、7.0、7.5、8.0）4 因素 5 水平着手，按照均匀设计表 U5（54），共设计 25 个试验处理，通过测 定不同处理组合发酵产物中的植酸酶活性，经正交方差分析及极差分析得到发酵温度、时间周期、 底物初始水分和 pH 等的最优发酵条件参数；采用 2 因子 5 水平正交设计，从底物组成（棉粕与玉 米不同比例）与接种量（1mL、3mL、5ml、7mL、9mL）2 因素 5 水平入手，按照正交设计表 52， 共设计 25 个试验处理，通过测定不同处理组合发酵产物中的植酸酶活性和枯草芽孢杆菌数量两个指 标，经两因子有重复观察值的数据进行方差分析和多重比较，确定底物组成及接种量的最优条件参 数。本试验旨在确定棉粕源生物饲料发酵条件参数和发酵底物组成及接种量。试验三：根据试验二 研究结果，制备优质棉粕源枯草芽孢杆菌发酵饲料，发酵结束后，测定发酵产物枯草芽孢杆菌菌数、 植酸磷、植酸酶活性、蛋白酶活性以及常规营养指标（DM、CP、EE、NDF、Ash、Ca、P）等，综 合评定产物的生物学特性和营养价值。 结果：试验一：用 UV、NTG、UV－NTG、NTG－UV 四种方法选育枯草杆菌，经紫外诱变 100s 后的枯草芽孢杆菌植酸酶活性最高，植酸酶产量 71.96U/mL，比筛选菌株提高了 38.46%。因此确定 紫外线诱变方法为最佳诱变方式，紫外线处理 100s 为最优诱变条件。试验二：产植酸酶枯草芽孢杆 菌生物饲料的发酵参数为：温度 37℃，时间周期 72 h，底物初水分 30 %，初