多头带绦虫Tm18基因的克隆与原核表达-预防兽医学专业论文.docxVIP

中文摘要 i 唰州州州川 (18U ι I，.U 脑多头蝴病又称脑包虫病，是多头带缘虫 (Taenia multiceps) 的中练期幼虫(脑 多头蝴 Coenurusce cerebralis) 寄生于羊和其他有蹄类动物的的脚、脊髓内，引起中 枢神经系统的功能障碍的一种人裔共患寄生虫病。该病里世界性分布，尤其以牧区较 为常见。脑包虫病的药物疗法效果不稳定:手术疗法效果虽好，倪仅适用于脑表层的 包囊。随着人们对食品安全的关注和寄生虫耐药性的出现，免疫接种草新受到人们的 重视。早期进行疫苗研究的抗原均为天然抗服，虽然对脑包虫的免疫预防布…定的效 果;但是由于受抗原来源的限制，使其很难推广应用。在这种情况下，基因工程疫商 成为一个不锚的选择。 本研究根据巳知的带科练虫的 18 kDa抗原基因的序列设计一对特异性引物，对多 头带缘虫六钩蝴总 RNA进行RT PCR扩增，得到约 552怜的目的片段。回收目的片段并 克隆到PMDl 争T载体上，序列测定结果显示本次实验首次扩增出了中国株多头带练虫 的18 kDa抗原基因，命名为 Tm180 扩增的序列中包含完整的开放阅读框，编码由 131 个氨基酸组成的蛋白质。软件分析表明多头带练虫四川株 Tm18与国外报道的多头带练 虫土耳其株(序列号为 EF672034) 同源性为91.26% ，氨基酸序列问源性为79.39%。 根据获得的基因序列设计一对表达引物，构建原核表达质粒，转化表达宿主菌 BL21(DE3)进行原核表达，同时对表达条件进行优化，确立了pG EX4T-rTm18 表达的 最佳条件为 37 c、 0.6 mmol/L IP丁G 诱导 8h，融合表达的Tml8 蛋白分子量为 39.4 kDa，并以不榕的包涌体形式存在于菌体中:免疫印迹表明该表达蛋白能与脑包虫病 患学血清相识别。纯化的熏组蛋白与弗氏完全佐剂 (FCA) 混合液免疫接种小鼠后，用 ELISA 检测其特异性抗体水平的变化，丁 m18 组与对照组相比小鼠血清中 IgG、IgGl 和 IgG2a 抗体显著升高。研究结果表明 rTm18 重组蛋白具有良好的免疫原性，可以 作为免疫保护性抗原用于脑包虫疫苗的研制。 关键词z 多头带练虫; Tm18基因:克隆:原核表达:免疫原性 英文摘要 αon?Dg and prokaηotic expression 01Tm18 gene 01T?enia multiceps oncospheres Wang Yingwang (preventive Veterinary Medicine) Directed by professor Yang Guangyou (Department ofParasitology，College ofVeterinary Medicine，Sichuan Agricultural University，Ya回， Sichuan，625014) Abstract:Coenurosis ，which is a kind of serious fatal zoonoses，is caused by the p即出itism of Coenurus cerebralis，and develops in the central nervous system of sheep and other un伊lates.Coenurosis has been documented in scattered foci 由roughout the world ， particuly in pastureJand. Drug treatment of Coenurosis is relatively conservative ，the effect often unstable; s山gical 位eatment al由ough 由e prognosis is be忧er，but only applies to 由e brain surface of the cysts. As people on 岛od safety concerns and the parasite 由ug resistance appearance，immunization regain attention. Early vaccine antigens are natural products，can prevent the Coenurus cerebralis inf机!ion effectively; However，because 由e antigen originates limited，it very