多胺在石刁柏体细胞胚胎发生中的作用研究-植物学专业论文.docxVIP

1 1 多肢在石刁柏体细胞胚胎发生中的作用研究 摘要 论文以石刁柏 UC800(A罚paragus 伊cinalis L. CV UC800)为材料，研究了石刁柏体 细胞胚胎发生过程中的生理生化变化，着重探讨了多胶在体胚发生中的作用及其机理由 1.首先对石刁柏体细胞胚发生系统的培养条件进行了优化。诱导初始愈伤组织 的最佳培养基为 MS+NAA 1 mg ? L-1+BA 0.5 mg ? L-l+2，4-D 2 mg ? L飞诱导胚性愈 伤组织的最佳培养基为 MS吃，4-DIO mg ? L-1+NAA 0.5 mg ? L-1，加入10 mg ? L-1 Put 可改善胚性愈伤组织的质量，诱导出的胚性愈伤组织米黄色、色泽亮丽、松散、颗 粒状、大小均匀一致。胚性愈伤组织诱导周期为 70 d ，第60 d 左右需继代扩繁。体 细胞胚诱导培养基为 MS 无激素培养基，在 7-8 d 胚性细胞团出现， 10--14 d 形成球 形胚、梨形胚， 21 d 时形成棒状胚， 28-30 d 观察到香蕉胚出现。 2. 以 MS+2，4-DI0 mg ? L-1+NAA 0.5 mg ? L-1+Put 10 mg ? L-1 为胚性愈伤组织 诱导和继代培养基，可使胚性愈伤组织继代 4 次仍有较高的胚胎发生能力，说明在 一定程度上可保持胚性愈伤组织的胚性。 3. 用高效液相色谱法 (HPLC)检测了不同时期培养物的内源激素和多肢含量。 结果表明，初始愈伤组织转入胚性愈伤组织诱导培养基后 lAA 水平迅速上升。胚 性愈伤组织出现时， lAA 和 GA3 都保持高水平，推测高水平的 lAA、GA3 与胚性细 胞的出现有关。在胚性细胞诱导过程中 Put 占多肢总量的绝大部分，高水平的 Put 持续到胚性愈伤组织产生，但 Spd 、Spm e水平较低，说明保持高比例的 Put/ (Spd+Spm) 可能有利于胚性细胞的产生。 4. 体胚发生过程中，外源 Put 在一定程度上提高了体胚发生频率，但外源 Put (25mg ? Ll) 并没有引起可溶性蛋白、抗氧化酶、精氨酸脱竣酶的大幅度变化，提 高了体胚发生前期 (0-14 d) 多胶氧化酶 (PAO) 的活性，说明外源 Put 剌激了内源 多胶代谢 。体细胞胚发生前期高水平的 Put 促进细胞的分裂、增殖和分化，有利于 球形胚的形成口 本文研究表明，多肢在石刁柏体细胞胚胎发生过程中起着重要的调节作用。适 当比例的内源多胶可调节外植体脱分化、胚性愈伤组织和体胚的形成过程，一定浓 度的外源 Put 引起内源多肢代谢变化，可保持愈伤组织的服性、改善胚性细胞的胚 胎发生能力，从而促进体胚发生和发育。 关键词:体细胞胚发生:石刁柏;外源多胶:内源多胶:内源激素:抗氧化酶 11 11 Study 00 Polyamines Roles in Somatic Embryogenesis in Asparagus (Asparagus 伊cinalis L.) Abstract The physiological and biochemical changes were studied during somatic embryogenesis in Asparagus (A再paragus 庐cinalis L. cv UC800)，and roles of polyamines on somatic embryogenesis and the mechanism were investigated. The conditions for somatic embryogenesis in Asparagus were optirnized. The rnost suitable medium were: MS+NAA lmg .L-1+BAO.5mg .L-1+2，4-D 2 mg .L-1 for primary cal1us induction and MS+2，4-DI0mg ? L-1+NAA O.5mg ? L-1 for embryogenic callus induction. Whitish-yellow，bright ，fresh，incompact and coincident particle embryogenic calli were obtained on medium supplemented with 10 mg ? L l putrescine. Embryogenic calli can be induced within 70 days，and calli need be transfered to fresh medium within 60 days for su