产氢产乙酸菌互营共培养体B6的选育及其菌群组成的优化-微生物学专业论文.docxVIP

Classified Index：Q93 U.D.C: 579 Dissertation for a Master’s Degree in Science SELECT BREEDING AND STRUCTURE OPTIMIZATION OF SYNTRPPUIC ACETOGENS COCULTURE B6 Candidate： GAO Chenchen Supervisor： Prof. Li Jianzheng Academic Degree Applied for： Master of science Specialty： Microbiology Affiliation: School of Muni. Env. Eng. Date of Defence： June, 2010 Degree-conferring-institution： Harbin Institute of Technology 哈尔滨工业大学工学硕士学位论文 哈尔滨工业大学工学硕士学位论文 - - I - 摘 要 在厌氧消化 系统中， 营养生态 位上位于 产酸发酵 菌群和产 甲烷菌群 之间的 产氢产乙酸菌群 ，因其具有 与耗氢菌互 营共生的特 性，其分离 培养 十分困难， 种子资源十分匮 乏，限制了 基于强化产 氢产乙酸功 能作用的高 效厌 氧生物处理 技 术 的 开 发 。 比 较 而 言 ， 产 氢 产 乙 酸 菌 互 营 共 培 养 体 的 分 离 和 筛 选 则 相 对 简 单，种子资源更 易获得，可 望成为开发 基于强化产 氢产乙酸功 能作 用的高效厌 氧生物处理技术 的突破口。 论文在对前期获 得的 7 个产氢产乙酸菌 互营共培养 体复壮的基 础上 ，通过 培养实验探明了 其群体生长 规律，并进 一步确定了 最佳接种时 间为 群体培养的 48~96 h； 通 过生 理 生 化实 验 和 产氢 产 乙酸 代 谢 强度 的 研 究和 比 较 ， 从中 优选 出一个以丙酸为 基质时增殖 和产氢产乙 酸代谢能力 最强的互营 共培 养体 B6。 从优化产氢产乙 酸菌互营共 培养体培养 条件的角度 出发，研究 并设 计了产 氢产乙酸菌的基础培养基，并探讨了温度、 pH 、排气方式、接种比例对共培 养体 B6 的 生 长 代 谢 和 产 氢 产 乙 酸 能 力 的 影 响 。 结 果 表 明 ， 在 42.5 ℃、 pH 7.2、常压排气、接种菌悬 液与液体培 养基的体积 比为 4:10 的条件 下，共培养 体 B6 可表现出最佳的底物 转化、增殖 和产氢产乙 酸能力。 为强化产氢产乙 酸互营共培 养体 B6 的产氢产乙酸 作用，通过 研究 确定了 B6 的优育 培 养基 、传 代培 养 方法 和培 养 条件 ，并 获得 了 菌群 组成 更加 简单、 产氢产乙酸代谢 特性更加突 出的互营共 培养体 B6-8c。PCR-DGGE 技术分析表 明，互营共培养体 B6-8c 中只有 4 种细菌存在，比 B6 减少了 3 种。 菌群 组成 分 析 表 明 ， B6-8c 与 B6 均 含 有 专 性 的 互 营 产氢 产 乙 酸 菌 Peptococcus sp.及其伴生菌，其中的伴 生菌为铁还 原细菌 Clostridium sp.，在代 谢过 程 中不 产生 CH4 或 H2 S，但 却有 剩 余的 氢 气和 乙 酸 。B6-8c 剔除 了 原来 B6 中 含 有 的 诸 如 产 氢 产 乙 酸 菌 的 共 生 菌 ： 能 利 用 乙 酸 和 氢 气 的 Sedimentibacter sp. 和 能 降 解 氨 基 酸 、 苯 甲 酸 、 甲 苯 等 的 细 菌 Clostridium hydroxybenzoicum。 关键词 厌氧消化；产氢产 乙酸菌；互 营共培养体 ；选育；菌 落组成；优化 - - II - Abstract Hydrogen-producing acetogens (HPA) whose trophic niche is between acidogenes and methanogens is very difficult to be separated and purified due to their syntrophism with hyddrogy-consuming bacteria. Resources scarce of hydrogen-producing acetogens has restricted the development of new anaerobic organic wastewater treatement process wit h high efficiency, base