常山酮联合放射治疗对小鼠移植瘤免疫微环境影响及机制研究-临床医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密 。 (请在相对应的方框内打“√” ) 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的：探讨常山酮联合放射治疗对小鼠移植瘤免疫微环境影响，并探索其可能 的机制。方法：将 40 只健康雌性 C57BL/6J 小鼠右后肢皮下接种 Lewis 细胞， 建立 Lewis 肺癌移植瘤模型，接种后第 6 天（肿瘤长径达 0.5 厘米大小时）进行 实验。挑选 35 只肿瘤负荷较相近小鼠随机分为空白对照组、常山酮组、放射治 疗组、放射治疗联合常山酮组，放射治疗联合 TGF-β 抑制剂组，每组 7 只。对 照组不做处理；常山酮组于接种后第 6 天至第 15 天予常山酮腹腔给药，每只鼠 2ug／0.1ml/d；放射治疗组于接种后第 8 天、9 天给予移植瘤 6MV-X 线照射，放 射治疗剂量为 10Gy×2；放射治疗联合常山酮组给药处理同常山酮组，放射治疗 的时间及剂量同放射治疗组；放射治疗联合抑制剂组于接种后第 6 天至第 15 天 予 TGF-β 抑制剂（SB431542 终浓度 1uM）腹腔给药，每只小鼠 0.1ml/d，放射 治疗处理同放射治疗组。自治疗开始每隔 l 天用游标卡尺测量瘤径。接种后第 15 天（照射结束后第 6 天）各组随机处死 3 只小鼠，取脾脏制备单细胞悬液后 行 FACS 检测脾脏淋巴细胞中 CD4+CD25+FoxP3+调节性 T 细胞 Treg 细胞含量； 剥离小鼠肿瘤组织，一部分制备单细胞悬液行 FACS 检测肿瘤组织浸润淋巴细胞 中 Treg 细胞含量，剩余部分福尔马林固定及冻存并通过免疫组织化学、Elisa、 Western Blot 等技术研究不同处理组移植瘤 TGF-β 信号传导通路的变化；剩余小 鼠观察移植瘤生长抑制情况，并计算生存期。 结果:流式结果显示：空白对照组、常山酮组肿瘤浸润淋巴细胞中 Treg 含量无明 显差异（P=0.989），放射治疗组肿瘤浸润淋巴细胞中 Treg 含量较对照组明显升 高（P＜0.001），联合应用常山酮或 TGF-β 抑制剂组肿瘤组织浸润淋巴细胞中 Treg 含量较放射治疗组明显下降(P 值均0.05)。空白对照组、常山酮组脾脏 Treg 含 量无明显差异（P=0.742），单纯放射治疗组脾脏 Treg 含量较空白对照组明显升 高（P=0.021），放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合 TGF-β 抑制剂组脾脏 Treg 含量较放射治疗组明显下降(P 值均0.05)；Elisa 结果:空白对照组和常山酮组肿 瘤组织中 TGF-β 水平无统计学差异 (P=0.271)，放射治疗组 TGF-β 水平较对照 组明显升高(P=0.001)，而放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合 TGF-β 抑制剂 组 TGF-β 水平较单纯放射治疗组均明显降低(P 值均0.05)。免疫组织化学结果： 空白对照组和常山酮组肿瘤组织中 TGF-β1 低表达，放射治疗组 TGF-β1 呈阳性 表达，放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合 TGF-β 抑制剂组 TGF-β1 低表达。 I Western Blot 结果显示，各处理组 Smad2 蛋白表达无明显差异，空白对照组与常 山酮组 p-Smad 2 蛋白表达水平无明显差异，放射治疗组 p-Smad 2 蛋白表达较对 照组升高，放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合抑制剂组 p-Smad 2 的表达较 单纯放射治疗组降低；各组 Smad 6 蛋白表达水平亦有差异，常山酮组和空白对 照组 Smad 6 蛋白表达无明显差异，放射治疗组 Smad 6 蛋白表达较对照组下降， 而放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合抑制剂组 Smad 6 的表达较单纯放射治 疗组均升高。治疗前各组小鼠肿瘤体积无统计学差异（P=0.377），治疗后各时间 点空白对照组及常山酮组小鼠肿瘤体积均无明显差异（P 值均＞0.05）