对番茄灰霉具有拮抗作用的高贵链霉菌的分离及功能研究-生物工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 Dissertation Submitted to Hebei University of Technology for The Master Degree of Biochemical Engineering Identification and primary investigation of the biocontrol mechanism of Streptomyces nobilis against Botrytis cinerea by Jiang Beibei Supervisor: Prof. Song Shuishan May 2015 This work supported by the National High-tech R ＆ D Program of China（863 Program）. No. 2011AA10A205 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，进行研究工作所取 得的成果.除文中己注明引用的内容外 ，本学位论文的研究成果不包含任何他人创作、 己公开的或没有公开的发表的作品的内容 .对本论文所涉及的研究工作做出 贡献的其 他个人和集体，均己经在文中一明确方式标明.本学位论文原创性声明的法律责任由 本人承担. 学位论文作者签名 : 暴佐佐 日期: 关于学位论文版权使用授权的说明 本人完全了解河北工业大学关于收集、保存、使用学位论文的规定 .同意如下各 项内容:按照学校要求提交的学位论文的印刷本和电子版本:学校有权保存学位论文 的印刷本和电子版，并采用影印、缩印、扫描、数字化或其他手段保存论文:学校有 权提供目录检索以及提供本学位论文全文或者部分的阅览服务 ;学校有权按有关规定 向国家有关部门或者机构送交论文的复印件和电子版:在不以盈利为目的前提 下，学 校可以适当复制论文的部分或全部内容用于学术活动 . 〈保密的学位论文在解密后适用本授权说明〉 学位论文作者签名: 基位传 导师签名:/务… 日期: 日朔: 河北工业 河北工业大学硕士学位论文 摘 要 番茄灰霉病是由半知菌亚门灰葡萄孢属（Botrytis cinerea）真菌侵染所引起的，是番茄生产上的重要病害之一。由于该病菌很容易产生抗 药性，化学农药很难防治且容易造成环境的污染，故筛选寻找出安全有效的生物防治 菌菌株来防治番茄灰霉病有重要的意义。 从沧州采集土样，采用稀释涂布法分离放线菌，并通过平板对峙法从土壤中分离 筛选到的一株对番茄灰霉病（B. cinerea）具有较强抑制作用的生防放线菌C51。最后，通过生物信息学工具BLAST以及 形态特征、生理生化分析，确定C51为高贵链霉菌（Streptomyces nobilis）。 通过对该菌株进行观察培养其形态特征、了解其生理生化性质、16S rDNA编码序列及其进化发育树的分析最终确定。 首先对菌株C51平板上的培养条件进行研究，确定其培养条件为：在初始pH值为7. 0改良的YEME培养基上28 oC下培养。并对菌落周围琼脂培养基浆液的抑菌活性进行测定，确定抑菌活性物质的 的产生是独立的，与病菌的存在与否无关，可以直接进行液体发酵进行研究。 本研究采用抑制菌丝生长速率法对菌株C51发酵上清液的活性进行测定，并显微 观察发现，发酵液中的活性物质可使灰霉菌菌丝体畸形，出现囊肿、膨大结构。进一步 研究发现，该菌株的发酵滤液对温度（28-121 oC）和酸碱性（pH 2- 12）都有很好的耐受性，经121 oC处理20 min后依然有76.4±0.4 %的抑菌活性被保留。经不同pH处理后其抑菌活性变化并不显著。之后，进行的盆栽 I 试验结果表明，菌株C51的发酵上清液对番茄灰霉病有较好的防治效果，经发酵液原 液处理的防病效果为72.63±0.33 %，与对照药剂嘧菌酯1000倍稀释液（72.51±0.80 %）的防治效果相当。因此，它有可能成为一种有效的生防制剂。 在摇瓶中对C51的发酵培养基及发酵条件进行了筛选。通过单因素试验和正交设 计试验，确定其最优培养基为：葡萄糖1.5 %、牛肉膏3.0 %、NaCl 0.04 %、KH2PO4 0.04 %、CaCO3 0.1 %。最佳发酵培养条件为：起始pH为6.8，温度28 oC，转速为200 r/min，种子液接种量6 %，装瓶量50 mL（在250 mL的三角瓶中），摇瓶发酵培养周期为10 d。 关键词：番茄灰霉病菌，生物防治，高贵链霉菌，发酵条件优化 II ABSTRACT Gray mold is incited by Botrytis cinerea, and it is a serious disease on tomato plants. The pathogen Bot