生化实验课件酶切实验-7年制.ppt

质粒酶切体系加样 酶切体系 20ul 6 x loading buffer 4ul DNA限制性内切酶双酶切分析 原 理 限制性内切酶是一类具有严格识别位点，并在识别位点内或者附近切割双链DNA的脱氧核糖核酸酶。 BamHⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG HindⅡ GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平端切口 粘端切口 Xba I: TCTAGA AGATCT Sal I: GTCGAC CAGCTG 实验步骤 10×Cutsmart Buffer 2 ?l 质粒DNA 1 ?l Xba Ⅰ 1 ?l Sal Ⅰ 1 ?l H2O 15 ?l 20 ?l 37℃水浴酶切2小时。1% 琼脂糖凝胶电泳鉴定。 NE buffer (pH 7.9) 150 mM NaCl 10 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 1 mM DTT 二