乳胶增强法测定C-反应蛋白的初步评价.PPTVIP

乳胶增强法测定C-反应蛋白的初步评价 毕业学生：谢嘉慧(广州医学院2000检本) 指导老师：易向民(广州市红十字会医院检验科) 摘要 目的 ：初步评价乳胶增强法测定C-反应蛋白(CRP)的临床应用性能。 方法： 依据NCCLS颁布的《定量临床检验方法的初步评价；批准指南(EP10-A)》文件，按特定的顺序连续5天测定低、中、高浓度质控品中的CRP，对测定CRP的乳胶增强法进行初步评价。 前言 CRP C-反应蛋白（C-reactive protein, CRP）是一种急性感染时相反应蛋白。正常人血清中其含量极微，在各种急性感染、组织损伤等情况下，血清CRP含量可迅速升高，随病情缓解又迅速下降，恢复正常。近几年来，CRP可作为一项预测、诊断和预防心脑血管疾病较具重要价值的指标。许多前瞻性研究证实在已确诊的心血管疾病个体中，CRP是将来发生心血管疾病发病率和死亡率的预测指标。更大的临床价值是证实CRP是将来发生首次冠状动脉疾病的强有力预测指标。 前言 测定CRP的方法 测定CRP常用方法有散射比浊法和免疫透射比浊法，目前用乳胶增强法测定CRP，是一种新的检测方法，我们参照NCCLS颁布的EP10-A文件所提供的实验设计与分析数据、分析步骤，对其进行初步评价。 材料和方法 一、材料 1、仪器 　 日立7600全自动生化分析仪。 2、试剂 CRP试剂盒(批号:005RGB)； CRP校准液(CRP calibrator,批号:003RIB) 均由日本第一化学药品株式会社生产 材料和方法 3、测定样品 　英国朗道公司定值液体质控血清 　将上述高值样品和低值样品等比混合为中值样品，CRP标定值52.3mg/L。 材料和方法 二、方法 1、日常常规开机，保养，定标，质控。 2、按NCCLS EP10-A文件测定样品CRP浓度 顺序如下：中值、高值、低值、中值、中值、低值、低值、高值、高值、中值（第一个中值为测定起始用，不作统计）。 3、每天测定一批，连续测定5天，得到低、中、高值数据各15个。每批测定为连续测试，在测定过程中，后9个数据中的任何一个不及格（被拒绝、丢失或由于任何原因没有报告），都须弃掉该批全部数据，重新测定。 4、数据处理 所有数据采用Excel软件进行统计学分析 材料和方法 三、结果的判断标准 总不精密度的接受范围 由于乳胶增强法测定CRP尚没有规定标准的允许不精密度，故我们以散射比浊法要求的允许不精密度小于5%来评价。 绝对偏差的接受范围 全国临床化学室间质评规定,特殊蛋白测定方法的可接受范围为靶值±3SD，本室设定CRP可接受范围为靶值±2SD，低、中、高各浓度的允许偏差范围（±2SD）分别为±2.42mg/L、±5.23mg/L、±8.04mg/L。 结果 一、绘图及目测初评 1、目测离群点　见图1 结果 2、目测线性　　见图2 结果 二、线性回归方程分析 根据最小二乘法原理，CRP测定的回归方程为?=1.283+0.992x，确定系数r2=0.9999，回归较好。 结果 三、多元回归分析 1、偏差分析结果 见表1 表1 偏差计算（包括全部5天数据）Tab.1 Calculations of bias：all runs 结果 2、不精密度分析结果 见表2 表2 不精密度计算（包括全部5天数据）Tab.2 Calculations of imprecision：all runs 结果 3、多元回归分析小结 见表3 表3 多元回归小结（包括全部5天数据）Tab.3 Multiple regression summary：all runs 讨论 EP10-A文件 NCCLS颁布的EP10-A评价方案，主要用于评价临床实验室定量分析方法的线性、偏差和不精密度，可用于对自动分析仪、试剂盒、手工操作或其他临床体外诊断方法的初步评价。 特点：简便、实用，只需5天即可完成全部测试；所需时间和材料少，数据容易收集；通过作图分析和简单计算，结果一目了然；目测即可得到初步印象。 讨论 利用特定的测试顺序，使不同浓度之间互相交错，比较接近临床病人标本情况，使得结果也更真实。再运用多元线性回归，可对影响精密度的因素（如携带污染、非线性、漂移等）进行进一步的分析。 讨论 乳胶增强法测定CRP的检测原理和应用 原理：将抗人-CRP单克隆抗体包被于一种微小的颗粒(聚苯乙烯珠)上，标本中的CRP与颗粒表面包被的抗人-CRP抗体反应产生浊度，由全自动生化分析仪检测其浊度的变化；其浊度与标本中的CRP浓度呈比例，根据标准曲线，即可计算出标本中CRP的浓度。 讨论 许多研究表明，对健康人群来说，CRP的参考范围应为3mg/L。现测定CRP常用方