定点突变提高醇脱氢酶LkTADH催化制备他汀关键手性砌块-ChinaXiv.PDFVIP

定点突变提高醇脱氢酶LkTADH 催化制备 他汀关键手性砌块的酶活1 陈方，徐刚，杨立荣，吴坚平* 浙江大学化学工程与生物工程学院生物工程研究所 浙江 杭州 3 10027 摘要 (S)-6-氯-3-羰基-5-羟基己酸叔丁酯 （(S)-CHOH ）是他汀类药物合成的关键手性中间 体。利用醇脱氢酶催化6-氯-3,5-二羰基己酸叔丁酯不对称合成(S)-CHOH 是很有潜力的制备 路线，目前存在的主要问题是醇脱氢酶催化活性较低。首先对来源于Lactobacillus kefirDSM 20587 的醇脱氢酶的四点突变体LkTADH （A94T/F 147L/A202L/L 199H ）进行回复突变，确 定了关键位点147 和202 位，并获得比酶活提高1 倍的突变体M F 147L-A202L 。对这两个位点 进行饱和突变，获得比酶活比LkTADH 提高1.47 倍的突变体M F 147