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病害标本的采集与制作 植物保护专业 植物病理学课程 丁春梅 植物病害标本的采集和制作 一、实验目的　　植物病害标本是植物病害及其分布的实物性记载，有了标本即可在室外观察的基础上，开展室内各方面的研究工作，特别是病害诊断和病原物的分类鉴定工作，没有合格的标本就将无从做起，因此，病害标本的采集和制作是植物病研究和实验室的基本建设工作，标本采集和制作技术是植病工作者必须掌握的基本技术之一，通过本次标本采集和制作实践实习。学习标本采集和制作的常用方法。 二、材料和用具 标本夹、标本纸、采集箱、扩大镜、剪刀、小刀，纸袋、塑料袋、标签、麻绳、记载本、镊子、电炉（1000W）、瓷盆（直径40 cm）、标本瓶（500 mL、1000mL）、大烧杯（1000mL）、酒精灯、甲醛、酒精、蒸馏水、量杯或量筒（500 mL、1000mL）、醋酸铜、硫酸铜、5%～6%二氧化硫、硝酸亚钴、氯化锡等。 体视显微镜、显微镜 三、内容和方法 　(一)标本的采集　　1.方法：集中采集和平时田间活动随时分散采集相结合的方法进行，常年活动。 2.要求： 为提高标本的使用价值，对所采标本特提出如下要求。　　(1)症状应具典型性：标本应有典型的病状和病症，有的病害还应有不同阶段的典型症状，如谷子白发病不同时间的症状截然不同，形成所谓的“灰背”、“白尖”、“白发”、“看谷老”、“刺猬头”等症状，所以采集不同阶段的典型症状的标本，对正确识别病害是很重要的。　　(2)真菌病害要采集带有子实体的标本，因为不同的病原菌所致病状，有时是很相似的，单凭病状是不够的，因此必须鉴定病原菌才能作出最后的诊断。没有子实体的标本，有时是毫无意义的。　　(3)每种标本上的病害种类一定要单一，以便正确鉴定和使用标本，因此对所采集的标本要经严格挑选。　　(4)采集时要作必要的记载，以辅助标本的不足，记载的主要内容有：寄主名称、发病情况、环境条件、以及采集日期、地点、采集者姓名，为了采集方便，可印刷成“采集记载本”，按采集顺序编号使用。 3.采集注意事项 　(1)对不认识的寄主植物，应注意采集供鉴定用的枝、叶、花、果等部分，以便鉴定寄主。　 (2)适于干制的标本，尤其容易干燥卷缩的标本，如穗叶，要注意及时压制，否则叶片失水卷缩后无法展平。　 (3)腐烂的果实标本及柔软的肉质类标本，应先以标本纸分别包裹后，再放在标本箱中，并且不能装得太多，以免污染和挤压。　 (4)黑粉病类、白粉病类标本，也应以纸袋分装或用纸包好后，再放采集箱中，以免混杂。　 (5)标本的采集应有一定的复份，一般应在5份以上，以便用于鉴定，保存和交流等。 　(二)标本的制作 采集的标本要及时处理制作，制作方法有干制法和液浸两种。 干制法适用于一般大田作物及蔬菜果树的茎、叶、花及去掉果肉的果皮等； 浸渍法用于根茎(如土豆、地瓜等)及果实等多汁液的器官。 1.干制法 通常所说的蜡叶标本就是经干制法制成的标本，干制法简便易行，方法是将适于压制的标本分层压在标本夹中，一层标本，一层标本纸(每层3—4张)，以吸收标本中的水分，每个标本夹总厚度以3寸左右为宜，太厚不利于干燥，夹好用绳绑紧，放在阳光充足，通风干燥处自然干燥，干燥愈快，保持标本原色的效果愈好，所以标本质量的好坏在于勤换纸，勤晾晒，夏季，压制的前3—4天，每日换纸1—2次，以后每隔2—3天换纸1次，春秋可适当减少换纸的次数，直至彻底干燥为止，在换纸时，特别是在头一次换纸时，因为标本已经变软，易于铺展，要注意加以整理，使其具有一定的“姿势”。　　压制标本，除了自然干燥外，必要时也可进行人工加温快速干燥，将标本放在烘箱或土炕上，温度可提高到35—50℃，但换纸要更勤，至少2小时换一次纸，对某些容易变黑的叶片标本(如梨叶)可平放在有阳光照射的热沙中，使其迅速干燥，以达到保持原色的目的。　　此外，多汁或大型不好压制的标本，还可装挂在通风良好处风干或晒干。 2.浸渍法 果实及无性繁殖器官等必须用浸渍法保存在标本瓶中，浸渍液的种类很多，这里介绍常用的几种。①福尔马林50mL＋95％酒精300mL＋水2000mL； ②70％酒精； ③5％福尔马林。 常用于防腐，而不保持原色，宜保存肉质鳞茎、块根、果实等。 浸渍时应将标本洗净，浸泡在浸渍液中，使浸渍液淹没标本，用线将标本固定在玻片或玻棒上防止标本上浮，若浸泡标本量大，浸泡数日后应更换一次浸渍液。加盖密封保存，标本瓶上贴上标签。 　　 （2）保持绿色的浸渍液 　①醋酸铜浸渍液　以结晶醋酸铜逐渐加到50%的醋酸中，至饱和为止，将配成的原液用水稀释三、四倍使用。将稀释后的溶液加热至沸腾，投入标本，标本的绿色最初会被漂去，经三、四分钟，至绿色恢复后，将标本取出，用清水漂净，保存于5%的