病理生理学分子生物学新技术及其应用.ppt

Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics * Michael MZ, 2006 Total RNA 5 P OH 3 PAGE size separation 5 HO OH 3 Phosphatase 5 HO T4 RNA ligase 5 P P 3 3 adapter P 3 5 P P 3 T4 polynucleotide kinase -OH 3 P 3 T4 RNA ligase P 3 Ban Ⅰ Ban Ⅰ 5 adapter RT-PCR Ban Ⅰ Ban Ⅰdigest, religate, ligate into plasmid vector and sequence inserts miRNA基因克隆策略 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 第一节 代谢组学及其研究进展 毛细管电泳-质谱联用分析仪（兰州理工大学）型号： P/ACE MDQ-Deca XP plus 厂家：美国 Beckan Coulter-Finnigan Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 核磁共振技术（NMR） 基于具有自旋性质的原子核在核外磁场的作用下，吸收射频辐射而产生的能级跃迁谱学，主要用于反映化合物结构中的H和C原子的位置信息。 1H-NMR：在排除杂质及水峰的干扰下，1H-NMR的谱峰与样品中的化合物的氢原子是一一对应的。所测的样品中的每一个氢在谱图中都有唯一的谱峰与之相对应。图谱中信号的强弱则反映出样品中各组分相对含量的关系，适用于研究代谢产物。 第一节 代谢组学及其研究进展 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 第一节 代谢组学及其研究进展 北京大学实验室800兆核磁共振波谱仪 核磁共振： 电子云： 基于具有自旋性质的原子核在核外磁场的作用下，吸收射频辐射而产生的能级跃迁谱学。主要用于反应化合物结构中的H和C原子的位置信息。 hr-MAS of biological tissue 相同强度 Lipid CH2-CO Lipid CH2-C=C Lipid CH2-CH2-CO Lipid CH2 Lipid CH3 Citrate Lactate Alanine 放大＊１０ 人前列腺组织（prostate tissu）良性 vs. 恶性 癌症组织给出更多的脂类物含量（lipid ）！！！ Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 章文军等通过运用小波变换去除噪声、校正基线后，再进行Fisher 判别分析，得到了比传统分析更为清晰的代谢标识物。（Chinese Journal of analytical Chemistry, 2008, 10, 1338-1342.） 第一节 代谢组学及其研究进展 代谢组学研究一般包括四个步骤： 第一步，给予生物体一定的刺激。这种刺激可以是基因的变异、剔除或引入，体内生物过程的催化或抑制，致病或致病物质(无机、有机、病毒、细菌、寄生虫等等)的引入，以及各种环境因素的改变等等。 第二步，代谢组数据的采集。用核磁共振、质谱、色谱等分析手段测定其中代谢物的种类、含量和状态以及其变化。 第三步，建立表征代谢特征的时空模型。在代谢组学中最常用的建模方法是主成分分析(Principle Components Analysis, PCA)。其基本思路是以一种最优化方法浓缩数据，寻找几个由原始变量线性组合而成的主成分,以揭示原始数据的特征，提取基本信息，实现对数据的可视化和样本的分类聚集。 第四步，建立代谢物时空变化与生物体特性的关系，达到从不同层次和水平上阐述生物体对相应刺激的响应的目的。 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics * MicroRNA的研究及应用 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics * 10.1.1 概述 10.1.2.MicroRNA的分子生物学研究方法 10.1.3 MicroRNA的实验技术 10.1.4 MicroRNA与疾病 内容结构 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics * 概述 miRNA是由21~25个核苷酸组成的非编码RNA； 它通过与靶基因的3-UTR的配对，促进mRNA的降解或抑制mRNA的翻译从而抑制其靶基因的表达； 它在生物体生长发育、细胞增殖、分化、凋亡以及