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传播先进教育理念、提供最佳教学方法 --- 尽在中国教育出版网 * 二、基因工程的操作程序[填空] (4)DNA分子杂交　分子杂交　抗原—抗体杂交　个体生物学水平 基础知识梳理 一、DNA重组技术的基本工具 　基因工程又叫 ，指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和 等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。其操作水平 是在 上进行设计和施工，操作环境是在生物体外。 DNA重组技术 转基因 DNA分子水平 基础知识梳理 1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀” (1)主要来源： 生物。 (2)特点：能够识别DNA特定的 ，切开两个核苷酸之间的 。 (3)DNA末端：限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式： 和 。 原核 核苷酸序列 磷酸二酯键 平末端 黏性末端 基础知识梳理 2．DNA连接酶——“分子缝合针” (1)作用：将双链 “缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的 。 (2)种类 ①E·coli DNA连接酶：只能缝合DNA的 。 ②T4DNA连接酶：即可缝合DNA的黏性末端，又可缝合双链DNA的 。 DNA片段 磷酸二酯键 黏性末端 平末端 基础知识梳理 3．基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” (1)载体的种类 ①质粒：是一种裸露、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有 能力的 。 ② 的衍生物。 ③动植物病毒。 自我复制 双链环状DNA分子 λ噬菌体 基础知识梳理 (2)质粒载体的特点 ①能够在细胞内 。 ②具有一个或多个 ，便于供外源DNA片段插入其中。 ③具有特殊的 ，供重组DNA的鉴定和选择。 (3)质粒载体的处理：真正被用作载体的质粒，都必须在天然质粒的基础上进行 。 自我复制 限制酶切割位点 遗传标记基因 人工改造 基础知识梳理 二、基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取 (1)目的基因：指编码蛋白质的 。 (2)获取目的基因的方法 ①从基因文库中获取目的基因 a．基因文库的含义：将含有某种生物不同基因的许多 ，导入 的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 结构基因 受体菌 DNA片段 基础知识梳理 b.基因文库和种类 所有 一部分 c．目的基因的获取依据： (ⅰ)基因的 序列； (ⅱ)基因的功能； (ⅲ)基因在染色体上的位置； (ⅳ)基因的 产物mRNA； (ⅴ)基因的翻译产物蛋白质。 核苷酸 转录 基础知识梳理 ②利用PCR技术扩增目的基因 a．PCR的含义：是一项在生物体 外 特定DNA片段的核酸合成技术。 b．条件：已知基因的 。 c．过程：目的基因受热形成 ，与引物结合，在 的作用下延伸形成DNA。 d．方式：指数扩增＝2n(n为扩增循环的次数) 复制 核苷酸序列 单链DNA DNA聚合酶 基础知识梳理 ③人工合成法：若基因较小、 序列已知，可以人工合成。 核苷酸 基础知识梳理 2．基因表达载体的构建 (1)表达载体的组成：目的基因＋ ＋终止子＋标记基因。 (2)表达载体的功能 ①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并 且 给下一代。 ②使目的基因 和发挥作用。 (3)启动子：位于基因的 ，它 是 识别和结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。 启动子 遗传 RNA聚合酶 表达 首端 基础知识梳理 (4)终止子：位于基因的尾端，终止 。 (5)标记基因： 是否含有目的基因。 mRNA的转录 鉴别受体细胞 基础知识梳理 3．将目的基因导入受体细胞 转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持 的过程。 稳定和表达 基础知识梳理 (1)将目的基因导入植物细胞 方法： ①农杆菌转化法 a