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全脑辐照后大鼠脑组织中髓鞘的变化特征1 石志革，包仕尧，田野 苏州大学附属第二医院，苏州（215004 ） E-mail ：dryetian@ 摘 要：研究电离辐射后大脑组织脱髓鞘病变的发病过程。SD 大鼠受2 、10 或30Gy 全脑 照射后的1 周以及1、3 和6 个月时，采用酶联免疫吸附法测量脑组织中髓鞘碱性蛋白(MBP) 含量、用Luxol fast blue 染色法和电镜观察并分析髓鞘的病理学改变。结果表明2 、10 与 30 Gy 照射后1 周与1 个月的各组大鼠，其端脑组织中MBP 的含量与对照组相比均无明显 差别，但10 与30 Gy 照射后3 个月与6 个月中MBP 则有明显降低。髓鞘染色显示30 Gy 照射后6 月大鼠在胼胝体区有较典型的脱髓鞘病变存在。10~30 Gy 照射后1~6 个月各组在 超微结构上也有不同程度的髓鞘异常。病理学变化的严重程度与剂量、观察时间有明显的相 关性。10~30 Gy 照射后3~6 个月的大鼠脑组织中从分子、组织形态和超微结构等方面可出 现等一系列的髓鞘异常改变。 关键词：电离辐射，大脑，脱髓鞘，髓鞘碱性蛋白，大鼠 以往的研究已经证明：晚期放射性脑损伤以脱髓鞘和白质坏死为病理特征，少突胶质细 胞和血管内皮细胞是损伤发生的靶细胞[1-3] 。近年来，关于电离辐射对少突胶质细胞作用的 研究大多集中在细胞和分子水平早期的改变方面，而对于这些分子、细胞变化与在病理组织 学上发生脱髓鞘病变的相关性则不多[1,2.4,5] 。为此，笔者用髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein， MBP)含量测量、髓鞘特异性染色以及超微结构观察等方法，就全脑照射后6 个月之内大鼠 脑组织中髓鞘的变化特征进行了研究，现将结果报告如下。 1. 材料和方法 1.1 实验动物的分组与全脑照射：健康成年SD 大鼠，体重200 ± 15 g，苏州大学实验动 物中心提供，随机分为全脑单次0、2、10 和30 Gy 照射、观察时间点为照射后1 周、1 月、 3 月和6 个月的16 个组别；其中0 Gy 为对照组，受照射时被铅屏蔽，其它处理与照射组一 致。全脑照射用Philips SL-18 型电子直线加速器产生的能量为4 MeV 的电子线，剂量率是 210~220 cGy/min ，详细的投照与剂量确认方法见田野等的前文报告[6] 。 1.2 酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)MBP 含量的 测定：每组别中5 只大鼠在规定时间点3.6%水合氯醛作腹腔麻醉后，用约250 ml 肝素化生 理盐水经升主动脉全身灌注，断头完整取脑。随机切取其右或左侧约500 mg 端脑组织，置 于3 倍体积缓冲液(0.5% Triton X-100 PBS，PH = 7.4) 中，冰浴中充分匀浆，4 ℃低温离心15 min(10000 r/min) ，取0.1 ml 上清液。用ELISA 试剂盒（四川大学华西医学中心基础重组DNA 研究室出品）测定MBP 的含量，结果以µg/ml 为单位，具体步骤依据产品说明书进行。 1.3 髓鞘Luxol fast blue 染色与分析：对上述每组3 只大鼠另一侧大脑参照定位图谱冠 状位切取3 mm 厚的端脑组织块，放入4 %多聚甲醛液中固定，常规脱水、石蜡包埋后自头 向尾方向进行连续切片（片厚为5 µｍ）。取3 片用Luxol fast blue 法作髓鞘的特异性染色， 主要试剂Luxol fast blue 和Cresyl violet 购于美国Sigma 公司，具体步骤见[2,4] 。在光学显微 镜下对胼胝体区已染色髓鞘组织进行病理学定性检查，了解脱髓鞘病变程度。另取切片行 1本课题得到江苏省卫生厅重大科研课题资助项目(K200406)和苏州大学医学发展基金资助项目(EE123504) 的资助。 -1- HE 染色，进行常规病理学检查。 1.4 电子显微镜髓鞘超微结构的观察：各组别中再取各2 只大鼠在