杀蚊苏云金芽孢杆菌及其晶体蛋白的研究进展.docVIP

杀蚊苏云金芽孢杆菌及其晶体蛋白的研究进展 　　摘　要 自从发现苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)具有杀蚊活性以来，目前已发现多种Bt亚种或血清型对蚊虫具有杀虫活性，同时也发现了一些新的杀蚊晶体蛋白。在对杀蚊晶体蛋白的分子结构进行研究的基础上，对其的作用机理有了一定的了解。近年来利用DNA重组技术显著提高杀蚊晶体蛋白的合成和将不同菌种的杀蚊晶体蛋白进行联合表达，为有效控制蚊虫危害展示广阔前景。 　　关键词　苏云金芽孢杆菌，蚊虫，晶体蛋白，研究进展 　　 　　苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)是一种革兰氏阳性细菌，它在形成芽孢的同时产生晶体包涵体。包涵体主要为δ内毒素杀虫晶体蛋白，被敏感昆虫的幼虫吞食后，在幼虫肠道碱性环境和蛋白酶的作用下释放出活性毒性蛋白，活性毒性蛋白与幼虫中肠上皮细胞的特异受体发生结合并形成孔道，破坏细胞渗透压平衡，最终导致昆虫死亡。Bt的杀虫活性范围主要包括无脊椎动物节肢动物门中的鳞翅目昆虫、双翅目、鞘翅目、直翅目等9个目的昆虫。 　　大多数Bt菌株主要对鳞翅目昆虫有特异杀虫作用。在1976年，Goldberg等发现了BtONR-60菌株对蚊虫具有很强的杀虫活性。这种菌株属于一种新的血清型并被命名为Bt以色列亚种(Bt subsp.israelensis)，在它的包涵体中发现了多种杀虫晶体蛋白成分。随后，出现了大量有关新的杀蚊Bt菌株及其晶体蛋白的研究。蚊虫能传播多种疾病，尤其以疟疾和乙脑危害最为严重，目前世界上约有5亿多人口遭受疟疾的威胁。80年代Bt开始用来控制蚊虫。目前已对有杀蚊活性的Bt菌株中晶体蛋白结构和有关分子作用机理进行了广泛而深入地研究，并着手利用现代生物技术手段提高杀蚊效果。无疑，研究高效的Bt生物杀虫剂对控制蚊虫具有非常重要的现实意义。 　　 　　1杀蚊苏云金芽孢杆菌及其晶体蛋白 　　 　　1.1杀蚊苏云金芽孢杆菌 　　目前已发现大约30多种Bt亚种或血清型对不同种类的蚊虫具有杀虫活性，除美国和澳大利亚外，世界各大洲均发生了具有杀蚊活性的Bt。其分离来源包括土壤、沉积物、植物、昆虫、动物粪便和水体。这些菌株属于不同的亚种或血清型，高毒力菌株不限于Bt以色列亚种，还包括canadensisi亚种、morrisoni亚种、darmstadiensis亚种、thompsoni亚种和Jegathesan亚种，它们的杀虫活性由高到低。这些杀蚊Bt菌株有一个共同特点，即它们的大质粒具有编码6内毒素包括溶细胞毒素(cytolytic toxin，cyt)基因，不同菌株之间毒性差异较大，其原因可能与各种晶体蛋白基因和溶细胞毒素基因存在与否有关。 　　1.2杀蚊晶体蛋白 　　Bt以色列亚种具有很强的杀蚊活性，主要有4种蛋白，即CytlA，Cry4A，Cry4B和CryllA，其分子量分别为27.3，128，134和72kDa。Bt jegathesan亚种包涵体中有6种主要蛋白，其分子量分别为80，74～70，65，37，26和16kDa，其中80kDa蛋白与Bt以色列亚种CryllAa有58％同源性，命名为CryllBa，它是这6种蛋白中毒性最强的成分；26kDa蛋白成分与Bt以色列亚种Cyt2Ba有68％的同源性，命名为Cyt2Bb。Bt medellin亚种的包涵体含有4种主要蛋白成分，其分子量分别为94，70～68，30和28 kDa，其中94 kDa蛋白与CryllBa有83％的同源性，命名为CryllBb。从Bt medellin亚种中还发现了一种新的溶细胞毒素Cyt2Bc，其分子量为29.7 kDa，它与Cyt2Ba有91.5％的同源性。此外，还在Bt jegathesan亚种中发现了一种86kDa的Cry20Aa杀蚊晶体蛋白。Rosso等还从Bt　jegathesan亚种中发现2种新的杀蚊晶体蛋白基因，即cryl9A基因和orf2基因，前者编码60kDa蛋白，含有5个保守序列区，而后者编码的蛋白质其氨基酸组成与cry4的C末端相似。在Bt serovar higo菌株中发现了98kDa的Cry27A、71kDa的Cryl0A和78kDa的Cryl9B 3种杀蚊晶体蛋白。 　　目前发现的具有杀蚊活性的Bt晶体蛋白主要有两类，一类为特殊的内毒素即溶细胞毒素，另一类为通常的内毒素晶体蛋白。前者主要包括CytlA，Cyt2Ba，Cyt2Bb和Cyt2Bc，后者主要是Cry2Aa，Cry4A，Cry4B，Cryl0A，CryllA，CryllBa，CryllBb，Cryl9A，Cryl9B，Cry20Aa和Cry27A。 　　 　　2　杀蚊晶体蛋白的结构研究 　　 　　对CrylAa，Cry2Aa和Cr