常见的11基因治疗.ppt

第 十 一 章 基因治疗 Gene Therapy 本章，我们讨论4个问题。 1.概述  2.基因治疗的原理 3.基因治疗中外源基因导入技术 4.基因治疗的应用研究 3、技术关键: ①专一性：针对靶序列设计高度选择性的反义基因； ②稳定性：通过化学修饰，使反义基因能抵抗体内核酸酶的进攻，延长反义基因的寿命。 ③摄取及分布:直接通过扩散作用进入细胞内，同时还通过细胞内吞作用入胞 。 ODN的摄取过程是一个依赖于碱基序列长度、活性及饱和的内循环过程。 第 五 节 基因治疗的应用研究 除外伤性疾病外，所有疾病都是遗传因素（内因）与环境因素（外因）相互作用结果。 ①遗传因素起主要作用疾病如：血友病、白化病、苯酮尿 症等； ②环境因素起主要作用疾病如：传染病、营养性疾病等； ③二者都起重要作用疾病如：糖尿病、高血压、冠心病、肿瘤、精神分裂症等。 目前发现：单基因病4000多种，多基因病不少于1000种，染色体病100多种，随着传染病与营养性疾病的有效控制和科技经济文化的进一步发展，遗传病患病率有相对上升趋势。 （一）3个考虑因素和3个困难： 1. 3个考虑因素： 1）对该病有关基因应详尽了解，能在实验中克隆该基因，并能导入真核细胞中表达； 2）只需产生较少量原来缺陷基因表达产物就能矫正疾病； 3）即使导入基因过渡表达，对机体也无不良反应。 一.遗传病的基因治疗 2.3个困难： 1）导入外源基因调控问题 导入外源基因（治疗基因）接受体内调控系统的统一调控，这在目前难以做到，有待进一步研究。 2）有些遗传病是某些特殊细胞损伤造成的，这些细胞不易取出供体外基因工程操作用 3）单基因遗传病，缺陷只局限于某一个发病的基因，但其造成临床结果往往广泛累及多个脏器 目前只有几种体细胞适用体外基因治疗 1.腺苷脱氨酶（adenosine deaminse,ADA）催化反应 腺嘌呤脱氧核苷 次黄嘌呤苷→次黄嘌呤→黄嘌呤→尿酸(醇式)(人和猿的终产物) 2.ADA缺陷生化代谢障碍及其临床症状 ADA缺陷↓ →腺嘌呤核苷酸代谢受阻→dATP↑→T淋巴细胞DNA链不断崩解，同时激活DNA依赖的ADP-核糖聚合酶的活性,降低NAD水平，使蛋白质合成减少细胞死亡，同时也影响B细胞功能。 ADA缺陷常伴有重症联合免疫缺陷（SCID）症状。 ADA （二）腺苷脱氨酶（ADA）缺陷遗传病的基因治疗 1）单个核细胞的分离：使用淋巴细胞分层液分离患儿血中单个核细胞； 2）单个核细胞培养：以“OKT3抗体+IL2”刺激体外培养T细胞增殖，分化； 3）逆转录病毒载体介导外源基因转染T细胞； 4）将转染细胞回输给患儿体内。 3.ADA基因治疗方案： ADA缺陷的基因治疗始于1990年9月14日，治疗对象是1个4岁的美国女孩，方案是： ADA缺陷基因治疗获得了成功，但每间隔3～5个月，同样的基因治疗操作程序必须同样重新进行。治疗麻烦给病人也增加了痛苦，这是因为淋巴细胞寿命只有几个月时间。研究者正在考虑是否使用寿命较长的靶细胞，当然以骨髓干细胞的转导和回输为好，人们在不断努力。 4.问题 二.肿瘤的基因治疗 1.抑制和杀伤肿瘤细胞 1）恢复抑癌基因功能 转染正常抑癌基因于肿瘤细胞，使之表达正常抑癌基因产物，在一定程度上抑制肿瘤的恶性表型，如转染P53和RB。 2）抑制癌基因的表达 ①使用抑癌基因关闭癌基因表达或使其表达产物失活； ②使用反义核酸抑制癌基因的转录 （一）肿瘤基因治疗策略 依据 : HSV-tk 基因编码的胸腺嘧啶激酶可将开环鸟苷的衍生物GCV（Gancilevir）转变成有毒性的代谢产物，后者能杀死正在分裂的（肿瘤）细胞。 方案 : 用“HSV-tk基因”重组逆转录病毒载体转染tk基因。 特点 : ①插入的HSV-tk基因的重组逆转录病毒载体只能整合至恶性肿瘤细胞染色体,对正常细胞不整合; ②GCV只能杀死表达HSV-t