二氧化硅粒子表面聚合物蛋白质混合型分子刷的制备-高分子化学与物理专业论文.docxVIP

南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名：杨晓娜 2015 年 5 月 20 日 非公开学位论文标注说明 (本页表中填写内容须打印) 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本 说明为空白。 论文题目 申请密级 □限制(≤2 年) □秘密(≤10 年) □机密(≤20 年) 保密期限 20 年月日至 20 年月日 审批表编号 批准日期 20 年月日 南开大学学位评定委员会办公室盖章(有效) 注：限制★2 年(可少于 2 年);秘密★10 年(可少于 10 年);机密★20 年(可少于 20 年) 摘要 近二十年来，固定化酶在化学和制药工业中得到了广泛的应用。固定化酶 与自由酶相比具有很多优势，例如，固定化酶可以提高酶的稳定性和活性，反 应产物及酶催化剂更容易从反应体系中分离等。尽管已有大量文献对固定化酶 的基本性质进行了广泛而深入的报道，但在以前的工作中，人们仅将酶固定在 固体表面，这极大地限制了其应用。 在本研究中，为了提高蛋白质的稳定性并控制其活性，我们把温度响应型 聚合物分子刷和蛋白质分子共同固定在二氧化硅纳米粒子的表面。首先，通过 二氧化硅粒子的表面化学改性合成二硫吡啶功能化的二氧化硅粒子，然后通过 巯基-二硫键交换反应将端基为巯基的聚甲基丙烯酸寡聚乙二醇酯 (POEGMA) 和牛血清白蛋白(BSA) 分子接枝到二氧化硅粒子表面。我们利用 X 射线光电子 能谱仪(XPS)、热失重分析(TGA)、动态光散射(DLS)、zeta 电位、紫外-可见光 谱仪、核磁共振谱、共聚焦显微镜(CLSM)和透射电子显微镜(TEM)等手段表征 了二氧化硅粒子表面的蛋白质分子刷和聚合物/蛋白质混合型分子刷。从测试结 果来看，聚合物分子刷不仅保护了蛋白质分子而且提高了二氧化硅粒子在水中 的分散性能。BSA 的蛋白质活性可以由温敏型 POEGMA 聚合物分子刷控制， 在 POEMGA 的低临界溶解温度(LCST)之下时，BSA 的活性不受聚合物分子刷 的影响；而在 LCST 之上时，BSA 的活性会显著下降。为了研究新型接枝反应 在固定化酶中的应用，我们还利用巯基-二硫键交换反应在二氧化硅粒子表面制 备了 BSA 蛋白质刷并对其催化活性进行了研究。 关键词：蛋白质分子刷；混合型分子刷；二氧化硅粒子；巯基-二硫键交换反 应 I Abstract During the last two decades, immobilization of enzymes on solid surfaces has been explored extensively and found biocatalytic applications in the chemical and pharmaceutical industries. Because immobilized enzymes have many advantages over free enzymes, such as enhanced stability, improved activity, and ease of separation from the reaction system.In the previous researches, only proteins are immobilized on the solid surfaces, whichgreatly limits its application. To improve the stability and control the activity of proteins, thermal-responsive polymer chains together with protein molecules are immobilized on the surfaces of silica particles in this research. Pyridyl disulfide functionalized silica particles were prepared by surface chemical reactions. Thiol-terminated poly(oligo(ethylene glycol) monome