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第四篇 临床免疫学与检验;第一章 概述;第一章 概述;第一章 概述;第一章 概述;第一章 概述;第一章 概述;第一章 概述;第一章 概述;第二章 抗原抗体反应;第二章 抗原抗体反应;第二章 抗原抗体反应;第三章 免疫原和抗血清的制备 ;第三章 免疫原和抗血清的制备 ;第三章 免疫原和抗血清的制备 ;第三章 免疫原和抗血清的制备;免疫程序 1、免疫原的剂量： 剂量过大或过小都有可能产生免疫耐受，在一定剂量范围内，免疫原剂量越大，产生的抗体效价越高。 2、免疫途径： 皮内、皮下、肌内、静脉、腹腔、淋巴结等途径。皮内或皮下免疫时一般采用多点注射。初次免疫一般选择皮内接种，加强免疫和颗粒性抗原一般选择静脉注射。宝贵抗原可选择淋巴结内微量注射。 3、免疫间隔时间 第1次与第2次免疫间隔时间以10~20天为好，第3次及以后的间隔一般为7~10天。 采血法 1、颈动脉采血法 2、心脏采血法 3、静脉采血法;第三章 免疫原和抗血清的制备;第三章 免疫原和抗血清的制备;第四章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备;第四章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备;第五章 凝集反应;第五章 凝集反应;第五章 凝集反应;第六章 沉淀反应;液体内沉淀实验 抗原抗体溶液在电解质的存在下结合，形成絮状沉淀物，这种絮状沉淀受抗原抗体比例的直接影响，因此常用来作为测定抗原抗体反应最适比例的方法。 1、抗原稀释法； 2、抗体稀释法； 3、方阵滴定法（棋盘滴定法）。 免疫浊度测定本质上属于液体内沉淀反应，可进行液体中微量抗原、抗体及小分子半抗原定量检测。 抗原过量：形成IC（免疫复合物）分子小，且会发生再解离，浊 度下降，这叫做高剂量钩状效应。 抗体过量：IC的形成随着抗原的增加而增加，抗原抗体最适比例 处达到高峰，这就是经典的海德堡曲线理论。 免疫比浊法的基本原理就是在反应体系中保持抗体适当过量。 抗体的选择：特异性强、效价高、亲和力强，使用R型抗体。 pH6.5~8.5 使用磷酸盐缓冲液做反应液 增浊剂：聚乙二醇（PEG）、吐温-20;凝胶内沉淀试验 利用可溶性抗原和相应抗体在凝胶内扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体浓度比例恰当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。 凝胶支持物：琼脂、琼脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺凝胶等。 1、单向扩散试验 在琼脂内混入抗体，待测抗原从局部向琼脂内自由扩散，如抗原和相应抗体结合，形成沉淀环。 Mancini曲线（M曲线）：适用大分子抗原和长时间扩散（＞48h）结 果，沉淀环直径的平方与抗原浓度呈线性关系。 Fahey（F曲线）：适用于小分子抗原和较短时间（24h）扩散的结果， 用半对数纸画线，浓度对数与扩散环直径呈线性关系。 双环现象：出现两种抗原性相同成分。;凝胶内沉淀试验 2、双向扩散试验 让抗原和抗体双方都在琼脂中各自向对方扩散，在比例恰当处形成抗原抗体沉淀线，观察这种沉淀线的位置、形状以及对比关系，可对抗原或抗体进行定性分析。 平板法是最常用的方法。 ①抗原或抗体的存在与否以及相对含量的估计： ②抗原抗体相对分子量的估计：扩散慢者圈子小，局部浓度大，形成的沉淀线弯向分子量大的一方，如果分子量大致相等，则呈直线。 ③抗原性质的分析：两条沉淀线相互吻合，说明抗体和两个抗原的相同表位结合而沉淀，两个抗原相同；沉淀线呈部分相切，说明两个抗原之间有部分相同；两条沉淀线交叉而过，说明两个抗原完全不同。 ④抗体效价的滴定：出现沉淀线最高的抗体稀释度为该抗体效价。 ⑤抗原或抗体纯度鉴定：多条沉淀线说明抗体不纯。;免疫电泳技术 1、对流免疫电泳 实质是将双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。 抗原带负电荷向正极移动；抗体在电渗作用下随水流向负极。 2、火箭免疫电泳 实质是加速的单向扩散试验。 3、免疫电泳 是区带电泳与免疫双扩散相结合的免疫分析技术。 抗原经电泳分区带，沿电泳方向挖一平行抗体槽，加入相应抗血清做双向扩散，形成弧形沉淀线。 多发性骨髓瘤患者血清在免疫电泳后，可观察到异常的M蛋白沉淀弧。 4、免疫固定电泳 电泳加沉淀反应技术，可用于各种蛋白质鉴定。 先将待测样品做区带电泳，覆盖抗血清，形成抗原抗体复合物而沉淀。分辨率强，敏感性高，操作周期短，结果易于分析，目前作为常规检测。