微电流刺激在眼科中应用.pptVIP

文献汇报 7-28 文献汇报 微电流刺激的优势 1969年，Wolcott 团队报告使用200-800微安电流加速伤口愈合， 瘢痕组织抗张强度更好， 抗菌能力更强。 安-舒二氏定律:弱刺激增强生理活动,强刺激抑制生理活动 微电流更接近生物体组织修复时的自发生物电流。 微电流刺激的作用 增加ATP的产生 增加蛋白合成 增加离子交换 加快细胞运输 加快血流速度 文献汇报 微电流刺激对视觉神经细胞存活与再生的作用 细胞实验—Retinal müller cells 动物实验---RCS大鼠 人体实验 经角膜电刺激 经皮电刺激 人眼解剖结果 视网膜 问题 电刺激对BDNF产生的作用机理是什么？ 背景介绍 Muller细胞: 视网膜中主要的胶质细胞 表达谷氨酸钠转运体 -保护神经节细胞 合成谷氨酰胺合成酶 产生多种神经营养因子(BDNF, bFGF, IGF) Ca2+: 第二信使 L型电压依赖性钙通道-钙流入-神经营养因子 电刺激引起钙流入从而诱发多种基因表达 实验方法 Muller细胞培养 95% 1代 电刺激: AgCl针型电极(直径0.2mm)插入培养液 间隔20mm 双相方波串 (脉宽1ms;频率20Hz; 电流10mA) 作用时间: 30分钟 微阵列分析 RNA样本与包含31099个目标探针杂交 量化实时聚合酶链反应RT-PCR?BDNF的mRNA水平 酶联免疫吸附法? BDNF蛋白水平 L-VDCC阻滞的量化实时PCR （硝苯吡啶） 实验结果 微阵列分析 电刺激下，245个探针表达信号强度比对照组高两倍以上 神经系统发育相关基因中BDNF的基因表达增加2.6倍 BDNF mRNA上调 2h,3h 增加1.2倍 6h 降低 L-VDCC阻滞 讨论 钙离子通过L型电压依赖性钙离子通道流入muller细胞上调BDNF的转录 Muller细胞不只合成BDNF，而且表达BDNF的特异受体 BDNF对光感受器和神经节细胞有神经保护作用 电刺激如何刺激L-VDCC的机制尚不明确 学到的知识 细胞的培养 细胞实验 基因表达分析 不足 微阵列分析只选择了一种神经营养因子 BDNF进行分析 问题 电刺激对BDNF产生的作用机理是什么？ 问题 本文采用的大鼠视网膜功能的评价方法是什么？ 背景知识 RCS大鼠(Royal College of Surgeon rat) 在英国皇家外科学院（Royal College of Surgeons）最早培育成功而得名。此鼠有常染色体遗传性视网膜变性，基因型为rdy；是目前研究某些形式的视网膜色素变性、遗传性黄斑变性及脉络膜缺损等疾病的动物模型 视网膜色素变性 (Retinitis pigmentosa, RP ) 感光细胞逐渐变性,进而演变成不可治愈的失明 遗传缺陷或基因突变 实验 动物 6只RCS大鼠（光照：12小时暗12小时亮循环，光照度：100 lux） 电极：双极性接触式电极 电流： 脉宽1ms；频率20Hz； 电流50, 100uA；双相方波； 持续时间 1h 效果分析: 视网膜功能：视网膜电图 视网膜形态：组织学观察 组织学观察 ONL, INL厚度随电流强度的改变 ONL, INL厚度随时间的改变 视网膜电图 ERG 讨论 验证电刺激对光感受器细胞形态和功能上的保护 延长光感受器的存活期 减缓视网膜功能的损失 对视网膜形态的保护 对整个视网膜均有保护作用(药物注射方法只能作用局部) 对内核层的厚度没有显著影响 动物模型 光感受器变性速度快，可考虑选用其他RP模型，如RPE65-缺陷小鼠 作用机理---尚不明确 未见明显副作用 学到的知识 RP动物模型 评价方法 不足 所用动物模型与人的RP病程特点有差异 电刺激模式简单，参数单一 问题 本文采用的大鼠视网膜功能的评价方法是什么？ 问题 经角膜电刺激的电流强度以多少为宜？ 方法 病人： 3 NAION, 5 TON 视锐度：0.01-0.2(NAION); HM-0.2(TON) 57-75 yrs (NAION); 14-71 yrs (TON) 4-24个月(NAION); 3周-11个月(TON) 电极：双极性接触式电极 介入过程： 0.4%奥布卡因盐酸盐麻醉 3%透明质酸+4%硫酸软骨素保护角膜 电流： 脉宽 10ms; 频率 20Hz; 电流 300uA-2mA (产生光幻点) 时间: 30分钟 视功能评价 最佳矫正视力（BCVA） 提高: ≥0.3logMAR 降低: 0.3logMAR 闪光临界融合频率 （CFF） 提高: ≥15% 外周视野 提高: ≥20% 降低: 20% 测量时间 治疗前，治疗后1个月，治疗后3个月 安全性 角膜上皮细胞、内皮细胞 IOP 眼内压， 眼底 瞳孔，前