炭疽检验技术-(精选·公开·课件).ppt

不特异 * 炭疽菌沉淀血清——购买 阳性对照：炭疽菌诊断抗原替代处理的可溶性热沉淀抗原 * 纸片放下后，不能再动。噬菌体实验中因蜡样芽孢杆菌可能会有假阳性，但因其对青霉素不敏感，所以两者同时做可以肯定。培养4—6小时可以看串珠实验结果。 * 串珠试验是对试验结果形象的称谓，其原理基于炭疽杆菌对青霉素敏感，低浓度的青霉素（0.05～0.5单位/毫升）即可阻碍细胞壁的形成，不能保持正常的杆状外形。培养4—6小时可以看串珠实验结果。 * 固体样品每20—30克加150ML水。 离心后取表层向下一点处取5—8ML。表层为絮状物。 * 上游引物：Forward primer，F-引物，又称为正向引物； 下游引物：Reverse primer，R-引物，又称为反向引物。 * 革兰染色 （二）炭疽病原学检查—— 显微镜检查 荚膜染色 （二）炭疽病原学检查—— 显微镜检查 采集到的标本均应进行细菌分离培养。 培养基选用血琼脂平板、营养琼脂平板和选择性平板。 （三）炭疽病原学检查—— 细菌分离培养 标本处理： 无菌的标本，如血液或脑脊液，直接涂布上述两种平板，每平板0.1ml，组织标本应先以无菌剪刀剪开一断面，在培养基表面压印，然后以白金耳涂开。 污染或陈旧的标本，均应首先制成悬液。根据标本中含菌量的多少，可将悬液适当稀释，或经自然沉淀除去粗大沉淀物后，再10000rpm离心1分钟，取富集的沉淀物。将所得的悬液沸水浴15min，冷却后涂布上述两种平板，每平板0.1ml。 （三）炭疽病原学检查—— 细菌分离培养 以上的平皿在37℃孵育过夜或24小时后，观察培养情况。 粗糙不发光，比较扁平，有点儿象蜡样杆菌的菌落但较小，卷发状。有的菌体形态不规则，有彗星状拖尾，白或灰白色。 （三）炭疽病原学检查—— 细菌分离培养 在血平皿上为白色菌落，较粘，不溶血或微溶血 。 （三）炭疽病原学检查—— 细菌分离培养 在静止液体培养基中生长在上层和底部，培养基透明，拿起则呈丝絮状下垂，摇之均匀混浊，无菌膜和壁环 。 1、肉汤生长 （四）炭疽病原学检查—— 鉴定试验 诊断炭疽简便而快速的方法，其优点是培养失效时，仍可用于诊断，因而适宜于腐败病料及动物皮张或风干、淹浸过肉品的检验。但此法缺乏高度特异性，因为炭疽杆菌耐热抗原在其他腐生芽胞杆菌也共有。 新鲜、陈旧和外环境标本都可采样20-50g，加水5-10倍，煮沸10分钟，用双层滤纸过滤后制成可溶性热沉淀抗原，用于热沉淀反应（Ascoli试验。 2、Ascoli试验 （四）炭疽病原学检查—— 鉴定试验 取一玻璃沉淀管（直径2-4 mm，高20-40 mm），将0.3 ml炭疽菌沉淀血清加于小玻璃管底部，再缓缓加入采集处理的可溶性热沉淀抗原约0.3ml于血清上层，注意勿使液面混合。置37℃ 5 min，于两液面间出现白色沉淀环为阳性。 本实验应有炭疽菌诊断抗原作阳性对照。 炭疽菌沉淀血清 处理的可溶性热沉淀抗原 白色沉淀环 （四）炭疽病原学检查—— 鉴定试验 2、Ascoli试验 在盖玻片周围涂凡士林，将待检菌的液体培养物或固体培养物用生理盐水制成的均匀悬液滴于中央，再将凹玻片盖于其上。迅速翻过来使盖玻片在上，菌悬液悬成滴。置高倍镜下观察，细菌不应有运动。 3、动力试验 （四）炭疽病原学检查—— 鉴定试验 4、噬菌体裂解和青霉素敏感性 将挑取的可疑菌落密集划线接种于平板上，在划线区内一处滴一诊断用炭疽噬菌体，另一处贴一片青霉素纸片。37 ℃孵育8～24h后，在滴噬菌体处有透明噬菌体斑，青霉素纸片周围有明显的抑菌环，便宜可断定接种物为炭疽芽胞杆菌。 （四）炭疽病原学检查—— 鉴定试验 4、噬菌体裂解和青霉素敏感性 （四）炭疽病原学检查—— 鉴定试验 制备有牛肉消化液琼脂培养基的载玻片，涂种待检菌，在一端加青霉素纸片或纸条。置平皿中于37℃培养4 ～ 6小时后，在低倍镜下观察。在有菌生长和抑菌区的临界线处，应有明显典型串珠形态。 5、串珠试验 串珠试验时炭疽杆菌的形态：串珠状或长链状 （四）炭疽病原学检查—— 鉴定试验 ? 葡萄糖