生物化学技术操作指导.DOCVIP

生物化学实验技术操作指导 天津科技大学 生物化学课程组 2006.12 目录 生物化学实验须知?????????????????????????????? 2 实验室一些常用知识介绍??????????????????????????? 3 实验一：离子交换法分离氨基酸 ??????????????????????? 7 实验二：垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质????????????????? 9 实验三：马铃薯多酚氧化酶制备及性质实验???????????????????13 实验四：碱性蛋白酶活力的测定 ???????????????????????16 实验五: 植物组织中DNA和RNA的提取和鉴定 ????????????????19 实验六：糖酵解中间产物的鉴定????????????????????????22 实验七：综合设计实验—蛋白质的制备及其含量测定???????????????24 实验八：还原糖和总糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法） ?????????????35 实验九：发酵过程中无机磷的利用???????????????????????37 实验十：氨基酸的分离鉴定—纸层析法?????????????????????39 实验十一：细菌血栓溶解酶活性测定??????????????????????41 实验十二：可溶性糖的硅胶G薄层层析?????????????????????43 实验十三：植物材料中总黄酮的提纯与鉴定???????????????????44 实验十四：IEF/SDS双向电泳分离鉴定蛋白质???????????????45 附 录 ??????????????????????????????????49 一、实验室主要仪器使用操作规程与注意事项??????????????????49 二、常用缓冲溶液的配制???????????????????????????55 三、硫酸铵饱和度的常用表??????????????????????????60 生物化学实验须知 1．实验室规则 (1) 实验课必须提前5分钟到实验室,不迟到,不早退，应自觉遵守课堂纪律。 (2) 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约, 应特别注意保持药品和试剂的纯净, 严防混杂污染。 (3) 实验台、试剂药品架必须保持整洁, 仪器药品摆放井然有序。实验完毕,需将药品、试剂排列整齐, 仪器洗净倒置放好, 实验台面抹拭干净, 经教师验收仪器后, 方可离开实验室。 (4) 使用和洗涤仪器时, 应小心谨慎, 防止损坏仪器。使用精密仪器时, 应严格遵守操作规程, 发现故障应立即报告教师, 不要自己动手检修。 (5) 在实验过程中要听从教师的指导, 严肃认真地按操作规程进行实验, 并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。课后写出实验报告, 由课代表收齐交给教师。 (6)仪器损坏时, 应如实向教师报告, 真填写损坏仪器登记表, 然后补偿一定金额。 (7)每次实验课安排同学轮流值日, 值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。 2．实验记录 实验课前应认真预习实验内容，将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。实验记录本要标明页码，不能随意撕掉任何一页。 实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。实验中观察到的现象、结果和得出的数据，应及时直接记在记录本上，绝对不可以随意记在单片纸上。原始记录必须准确、简练、清楚。 3．实验报告的书写 实验结束后,应及时整理和总结实验结果, 写出实验报告。 标题 标题应包括实验名称、实验时间、实验室名称、实验组号、实验者及同组者姓名、实验室条件。 实验目的 实验原理 应简述基本原理，不要完全照抄实验指导书。 （4）操作步骤 操作步骤 (或方法)可以采用流程图的方式或自行设计的表格来表达。 实验结果 将实验中的现象、数据进行整理、分析，得出相应的结论。建议尽量使用图表法来表示实验结果，这样可以使实验结果清楚明了。 讨论 包括对实验结果及观察现象的小结、对实验中遇到的问题和思考题的探讨以及对实验的改进意见等。 4．生物化学实验课评分标准 实验预习情况（10%） 实验操作情况（20%） 实验报告情况（30%） 实验考试成绩（40%） 实验室一些常用知识介绍 一．玻璃仪器的洗涤及一些常用的洗涤剂 1. 玻璃仪器的洗涤 （1）新购买的玻璃仪器, 首先用自来水洗去表面灰垢, 然后用洗衣粉刷洗, 自来水冲净后, 浸泡在 1%~2% 盐酸溶液中过夜以除去玻璃表面的碱性物质。最后, 用自来水冲洗干净, 并用蒸馏水冲洗 2 次。 （2）对于使用过的玻璃仪器, 应先用自来水冲洗,