试验四免疫细胞化学技术.PPT

实验四 免疫细胞化学技术 概念 免疫细胞化学，是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术。 基本原理 免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。 标本的制备 免疫组化对组织和细胞标本的要求： 保持所检标本原有的结构、形态； 在原位最大程度地保持待测抗原(或抗体)的免疫活性，既不淬灭、流失或弥散，也不被隐蔽。 组织标本：石蜡切片、冰冻切片 细胞标本：细胞爬片、细胞涂片 常用染色方法 根据标记物的不同分为免疫荧光法、免疫酶标法、亲和组织化学法。 免疫荧光法 用于免疫荧光的标记物是小分子的荧光素，可标记抗体或抗原； 荧光素经某种特定波长的光照射激发后，能发射出一种比激发光波波长更长而且能量较低的借助于荧光显微镜进行观察。荧光，籍此可作定位观察或示踪； 借助于荧光显微镜进行观察。 免疫酶酶标法 原理： 以酶作为标记物与外加底物作用后产生不溶性色素，沉积于抗原和抗体反应的部位； 酶降解底物的量与色泽浓度成正比。可反映被测定的抗原或抗体的量。 亲和组织化学法 是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础。 这种方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位。 生物素-抗生物素染色法： (1)标记抗生物素—生物素法(labelled avidin-biotin method, LAB)：分为直接法和间接法。 (2)桥抗生物素一生物素法(bridge avidin-biotin method，BRAB) (3) 抗生物素-生物素-过氧化物酶法（ABC法） 实验内容 1、荧光显微镜观察荧光染色组织切片 2、光镜观察酶标染色组织切片 3、免疫组织化学技术染色制备方法 思考题 免疫组织化学技术的基本原理是什么？ * 实验四 免疫细胞化学技术 所谓免疫细胞化学，是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术。 免疫组化的基本原理：是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。 首先标本的制备：免疫组化对组织和细胞标本的要求：1、保持所检标本原有的结构、形态；2、在原位最大程度地保持待测抗原(或抗体)的免疫活性，既不淬灭、流失或弥散，也不被隐蔽。 标本分为组织标本和细胞标本。组织标本：石蜡切片、冰冻切片，细胞标本：细胞爬片、细胞涂片 常用染色方法：根据标记物的不同分为免疫荧光法、免疫酶标法、亲和组织化学法。 免疫荧光法：用于免疫荧光的标记物是小分子的荧光素，可标记抗体或抗原； 荧光素经某种特定波长的光照射激发后，能发射出一种比激发光波波长更长而且能量较低的借助于荧光显微镜进行观察。荧光，籍此可作定位观察或示踪； 借助于荧光显微镜进行观察。 免疫酶酶标法：以酶作为标记物与外加底物作用后产生不溶性色素，沉积于抗原和抗体反应的部位； 酶降解底物的量与色泽浓度成正比。可反映被测定的抗原或抗体的量。 * * * 实验四 免疫细胞化学技术 所谓免疫细胞化学，是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术。 免疫组化的基本原理：是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。 首先标本的制备：免疫组化对组织和细胞标本的要求：1、保持所检标本原有的结构、形态；2、在原位最大程度地保持待测抗原(或抗体)的免疫活性，既不淬灭、流失或弥散，也不被隐蔽。 标本分为组织标本和细胞标本。组织标本：石蜡切片、冰冻切片，细胞标本：细胞爬片、细胞涂片 常用染色方法：根据标记物的不同分为免疫荧光法、免疫酶标法、亲和组织化学法。 免疫荧光法：用于免疫荧光的标记物是小分子的荧光素，可标记抗体或抗原； 荧光素经