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示踪法自体骨髓干细胞移植实验的研究 　　[摘要] 目的:研究大鼠骨髓干细胞移植后的定位与分化状态。方法:以荧光染料DiI为示踪剂对移植的骨髓干细胞进行标记,并通过门静脉移植入大鼠肝脏,分别于7、14、21、28 d采集移植鼠的肝组织进行荧光检测。结果:荧光剂DiI标记的干细胞在移植鼠肝组织中定位,并且分化增殖。其亮红色荧光随时间的推移略有减弱,但并不消失。结论:DiI荧光剂为可靠的干细胞示踪剂,可应用于移植细胞的标记,骨髓干细胞可在受损肝组织中定位并分化增殖。 　　[关键词] 示踪法;骨髓干细胞;移植;实验研究 　　[中图分类号] R-332 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721(2010)05(c)-013-02 　　 　　Experimental research on autologous bone marrow stem cell transplantation with tracer method 　　JIN Chunying,QU Naifang,ZHANG Pu 　　(Infectious Disease Hospital of Harbin City,Heilongjiang Province, Harbin 150030, China) 　　[Abstract] Objective: To research the location and differentiation of rats bone marrow stem cells after transplantation. Methods: Labeled rats bone marrow stem cells with fluorochrome DiI, transplanted the labeled cells into the rat livers via portal vein, collected and detected the hepatic tissues from the transplantation rats after 7,14,21,28 days respectively. Results: The stem cells labeled by fluorochrome DiI located, proliferated and differentiated in the livers of the transplantation rats. The red fluorescence declined over time, but it didnt disappear. Conclusion: DiI is a reliable stem cell tracer and can be used to label transplanted cells. Bone marrow cells can be located proliferated and differentiated in damaged hepatic tissue. 　　[Key words] Tracer method; Bone marrow cells; Transplant; Experimental research 　　 　　目前,骨髓干细胞移植作为一种新的治疗手段,在各系统疾病中有被广泛应用的趋势,但其效果也只能从各项生化、生理指标的变化来判定,很难做到直观判别移植的干细胞是否定位于靶位,分化与增殖而发挥作用。为探求了解移植干细胞在病变部位的状态,笔者用荧光剂DiI作为示踪剂对移植的骨髓干细胞进行标记、检测分析,现将结果报道如下: 　　1材料与方法 　　1.1实验动物 　　雄性SD大鼠10只,体重(200±20) g,清洁级,购自哈尔滨兽医研究所动物室。 　　1.2试剂与仪器 　　D-氨基半乳糖购自重庆医科大学试剂中心,亚硫酸钠、内毒素、DiI购自Sigma公司,淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物有限公司,rhG-CSF为山东齐鲁制药有限公司生产,荧光显微镜为德国莱卡480型,温控离心机为美国贝克曼产品。 　　1.3实验方法 　　1.3.1动物模型制备与干细胞标记10%D-氨基半乳糖溶液(以0.9%NaCl溶液配制,以0.1 mol/L NaOH调PH至7.4)按10 mg/kg体重,内毒素20 μg/kg体重一次性对模型鼠进行腹腔注射制备大鼠肝衰竭模型。对照组以0.9%NaCl溶液用同样方法制备。诱导肝衰竭后正常饮食,并于次日起以10 μg/kg体重rhG-CSF对模型鼠行皮下注射,每天1次,共计4次,于第5天从模型鼠舌下以肝素抗凝采血1 ml,给予混后的等量磷酸盐缓冲液(PBS)混匀,轻轻叠于1.0