《细胞工程制药》PPT课件.pptVIP

2.2 植物组培的实验条件和培养基 准备室：清洗区，干燥箱，工作台， 水箱，天平，灭菌锅等。 无菌操作室：超净工作台，可调节光 源，可调节温度 培养室：保温隔热，光线合适 培养操作器材：试管、 三角瓶、 玻 璃瓶、金属器材 一些设备 培养室 培养基 定义：含有一定营养成分，供组织培养植物生长的基质。 无机营养成分：C，H，O大量元素及部分微量元素。 有机营养成分 ①含N物质：包括维生素和氨基酸 ②碳源：2%—5%的葡萄糖 ③琼脂：起支持作用。 ④生长激素：生长素，细胞分裂素和赤霉素 PH值：5.0~6.0间 一般，在每次进行植物培养前可利用母液自行配制所需培养基 常用培养基配方 大量元素 植物所需要的元素，其浓度大于0.5毫摩尔/升应该属于大量元素 大量元素包括C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等九种元素，他们占植物干重的百分之几十到万分之几 生理作用：1）参与肌体构造；2）构成一些特殊的生理活性物质；3）电化学方面的作用:维持离子浓度平衡，胶体稳定，电荷平衡；4）发育方面起的作用：影响植物组织形态发生、器官形成。 当缺乏某种元素时，往往会表现一些缺素症： 缺N：某些组织呈现鲜艳的花色素苷的色彩，导管不能形成； 缺N、P、K：细胞变得肥肿而形成层组织减少； 缺S：产生非常明显的黄萎病；缺Fe：细胞分裂停止； 微量元素 植物所需要的元素，其浓度小于0.5毫摩尔/升应该属于微量元素。 微量元素包括Fe、Cu、Mo、Zn、Na、Mn、Co　B和I等，通常培养基中添加10-7—10-5就可满足需要 生理作用：酶的催化、细胞分化和维持细胞完整机能等方面 多年的研究结果： Cu有促进离体根生长的作用； Mo是合成活跃硝酸还原酶所必不可少的元素，也是固氮酶的组成部分，还有防止叶绿素受破坏的作用； Mg、Zn、Na是酶的组成成份，也有防止叶绿素破坏的作用； Mn与植物的呼吸作用和光合作用有关； B与糖的运输、蛋白质的合成有关。 铁盐 采用硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠结合成螯合铁配置而成 作用：促进细胞的分裂与生长；影响叶绿体的结构组成与叶绿素的形成。 有机成分 维生素类：植物组织培养中经常使用维C、维B1（盐酸硫胺素）、维B6（盐酸吡哆素）、维H（生物素）、叶酸和烟酸等，一般使用的浓度为0.1——10mg/l 肌醇：本身没有促进生长的作用，但有助于活性物质的发挥，并参与糖代谢，能使培养组织快速生长，对胚状体和芽的形成有良好的影响 氨基酸：甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、水解酪蛋白、水解乳蛋白 有机添加物：椰乳、香蕉等 琼脂 一种从海藻中提取出来的凝固剂，一般使用浓度为0.6%—1%。以前使用琼脂条，现在使用琼脂粉，以色白、洁净的为好。 糖 糖的作用：a.作为C源，为细胞提供合成新化合物的碳骨架；b.为细胞的呼吸代谢提供底物与能源；c.维持一定的渗透势。 使用最广泛的是蔗糖和葡萄糖，一般的使用浓度为2%—4%。 一般来说，以蔗糖做糖原时，离体的双子叶植物的根生长得最好，而以葡萄糖为C源时，单子叶植物的根生长得最好。 为了节省成本，一般选用食用白糖。 MS salts reduced to 0.47 g. l-1 ? MS salts increased to 9.52 g. l-1 ? 培养基对非洲紫罗兰组织培养的影响 Control No sucrose (0%) Sucrose reduced to 1% Sucrose increased to 5% 培养基对非洲紫罗兰组织培养的影响 气升式细胞培养反应器不仅在植物细胞培养中应用广泛,而且在动物细胞培养中也取得了很大的成功。 和搅拌式生物反应器相比，气升式反应器中产生的湍动温和而均匀，剪切力相当小；同时反应器内无机械运动部件，因而细胞损伤率比较低；反应器通过直接喷射空气供氧，氧传递速率高；反应器内液体循环量大，细胞和营养成分能均匀分布于培养基中。 3. 固定床或流化床式生物反应器 反应器内装不锈钢、玻璃珠、玻璃环、光面陶瓷、塑料或有孔的陶瓷、玻璃、聚氨酯塑料等载体 Verax公司推出的CF-IMMO培养系统（右图） 专用于比重较大的多孔微球的培养 4. 膜式生物反应器 培养分为两室或三室，培养基与细胞用滤膜分开 既可用于贴壁细胞培养也可培养悬浮细胞 优点：可使细胞达到很高密度；可随意组合进行操作，达到保留和浓缩产品或及时分离提纯产品 （四）动物细胞大规模培养的操作方式 分批操作(batch) 补料-分批操作 半连