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益母草颗粒微生物限度检查的方法验证 　　【摘要】按照《中国药典》2005年版附录对微生物限度检查的要求，采用常规法对益母草颗粒进行微生物限度检查方法的验证，确认所采用的方法适合于益母草颗粒的微生物限度检查，即确认益母草在该检验量，该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性被充分消除到可以忽略不计，以保证检验结果准确，可靠及检验方法的完整性。结果表明，益母草颗粒无抑菌作用，常规法对无抑菌作用的益母草颗粒进行微生物限度检查的结果可靠，准确。 　　【关键词】益母草颗粒；微生物限度检查；方法验证 　　【中图分类号】R917 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0168-01 　　药品微生物限度检查是控制药品微生物污染的重要手段，包括细菌，霉菌及酵母菌计数及控制菌检查，是药品安全性的重要指标之一。随着药品剂型的日益发展和药品标准的不断提高，及时有效地进行药品微生物限度检查是摆在药检工作人员面前的重大课题。药品微生物限度检查方法为《中国药典》1995年版首次收载，并在《中国药典》2005年版增订了方法验证实验，为药品微生物限度检查结果的可靠性提供了保障。 　　在做微生物限度检查时，经常发现有抑菌作用，那么对有抑菌作用的药物按常规法做微生物限度经常药品，以确认所 采用的方法适合该样品的微生物限度检查。本文结合执行《这个药典》2005年版及《美国药典》28版，《英国药典》2002版有关微生物限度检查法，按照中国药品检验标准操作规范及有关文献，以益母草颗粒为例。益母草颗粒为治疗月经量少，产后腹痛的药物，具有活血调经的功效。药品中含有益母草一味中药材成分，固益母草没有抑菌作用，可采用常规法进行实验研究，最终确定采用常规法进行细菌数，霉菌数及酵母菌数的测定，采用常规法进行控制菌的检查，经对所采用的方法进行验证，符合2005年版《这个药典》二部附录ⅪJ有管微生物限度检查法有关规定，方法可行。 　　益母草为唇形科植物益母草的干燥全草，又名茺蔚，益母蒿，坤草，月母草，地母草等，原生于山野荒地，田埂，河滩，草地，路旁，溪边等处，全国各地均有分布，部分地区有栽培，是常用的中药材品种。 　　益母草的化学成分主要有：①生物碱，近几年在生物碱的提取方法方面有了很大的改进，郭孝武等采用不同频率的超声波技术，该法工艺简单，提取率高，有较高的开发价值。王坤等用外循环灌装式提取工艺，提取率高并且节省能源，缩短生产周期，适用工业化生产。葛发欢等常用超临界二氧化碳萃取技术比常规法提高10倍；②二萜，从益母草中分离出34个二萜类成分，其中Labdane型二萜类成分prehispanone是一种血小板活化因子的拮抗剂，能竞争性抑制血小板上的血小板凝聚因子（PDF）受体，从而达到抗凝血目的。近期张娴等又从益母草中分离出2个化合物益母草酮A，β―谷甾醇，其中化合物益母草酮A为一种新的Labdane型化合物；③阿魏酸，罗毅等自益母草中提取分离出阿魏酸，并对其进行色谱鉴定，初步确定益母草种含有阿魏酸。研究者采用薄层色谱法和HPLC法鉴别不同提取溶媒制备的样品，各样品均从益母草中检出阿魏酸以百分之五的碳酸钠超声提取最好；④挥发油，王金辉等和丛悦等近期又从益母草的干燥地上部分的水提取物中经过大孔树脂，硅胶柱色谱，制备色谱和HPLC分离得到2个化合物，首次从该种植物中分离得到2，6-二甲基-2E，7-辛二稀-1，6-二醇和ajugoside。⑤其他，多糖：刘晓河等采用水杨酸法测定还原性单糖的含量和水解后的总糖含量，从而间接测出益母草中的多糖含量，该方法简便，快速，准确，消除了样品中还原性单糖对多糖含量测定的影响。微量元素：任晓伟等从细花益母草中测定到微量元素的存在，并且叶和花中的微量元素多与茎中的微量元素，与调经活血的机制是一致的；其他的还有黄酮，苷类如环烯醚萜苷类，苯丙醇苷类，强心甾苷类等。 　　益母草的药理活性主要有抗血栓形成，利尿，改善淋巴系统，兴奋子宫，抗诱变作用，减少心肌损害。 　　1. 样品名称及来源 　　名称：益母草颗粒 　　批号：1508014 　　生产厂家：广西灵峰药业有限公司 　　处方组成：益母草，蔗糖，糊精 　　2. 试验材料及仪器 　　仪器：35℃恒温培养箱：303A-6型 北京北德工贸有限公司 　　33℃恒温培养箱：303A-6型 北京北德工贸有限公司 　　25℃恒温培养箱：303A-6型 北京北德工贸有限公司 　　高压蒸汽灭菌器：LDZX-40Ⅱ型 上海申安医疗器械厂 　　调速多用振荡器：HY-2 国华电器有限公司 　　电子天平：SL102N 上海民桥精密仪器厂 　　试验菌株： 　　大肠埃希菌 Escherichia Coli [CMCC（B）44102] 　　金黄色葡萄球菌 Staphylococ