染色体畸变-精选（公开课件）.pptVIP

* * * * 实验流程总图 收获细胞：处死，取股骨，5ml PBS冲洗，1500r/min离心10min，弃上清 低渗：轻柔打散，加入0.075mol/L KCl 6ml，37℃低渗20min，加2ml固定液，1000r/min离心10min，弃上清 固定：4ml固定液轻柔混匀，室温15min，1000r/min离心10min，弃上清。再重复一次，留约0.5ml液体 制片染色：混匀细胞，悬滴于冰冻载玻片，晾干，10%Gimsa染色20min，清洗晾干 阅片：低倍镜找良好视野，换油镜观察 * 重要 动物骨髓细胞染色体畸变分析 主讲： 章征保 张辰子 联系方式：zhzhb12345@163.com * 实验目的及意义 掌握动物骨髓细胞染色体标本制作方法 了解动物体内染毒及染色体畸变常见类型 测试受试物导致动物染色体畸变的能力和畸变类型 * 实验原理 处于生长期的小鼠骨髓具有旺盛的造血功能，环磷酰胺导致染色体发生畸变，用秋水仙碱处理细胞使分裂的细胞停滞在有丝分裂的中期相，通过低渗使细胞膨胀，染色体分散开，然后固定，染色，在油镜下观察。 * 染色体数目的改变 1 非整倍体：亚二倍体或超二倍体。 2 多倍体：染色体成倍增加。 3 内复制：包膜内的特殊形式的多倍化现象。 染色体结构的改变 1 断裂：损伤长度大于染色体的宽度。 2 微小体；较断片小而呈圆形。 3 有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。 4 无着丝点环：成环状结构。 5 单体互换：形成三辐体、四辐体或多种形状的图像。????????????????? 6 双微小体：成对的染色质小体。?????????????????? 7 裂隙：损伤的长度小于染色单体的宽度。 8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等 * * 试剂 环磷酰胺：40mg/kg 秋水仙素：4mg/kg 缓冲液： PBS，pH6.8磷酸盐缓冲液（甲液49.4ml+乙液 50.5ml，调节PH为6.8） 低渗液： 0.075mol/L KCl 固定液：甲醇3份＋冰醋酸1份 染色剂： 姬姆萨染色液（磷酸盐缓冲液9份+Gimsa储液1份） * 实验设计 1 6-10只大/小鼠,♀♂各半 LD50 ——1/4、1/8、1/16，或最大耐受剂量为最高剂量+三个剂量，经口2～4次，间隔24h, 末次给受试物后18～24 h取材。 3 （-）（+） * 操作步骤 收获细胞 低渗 * 操作步骤 固定 制片染色 阅片 低倍镜下选择分散良好，细胞未破裂的中期分裂相，油镜下观察并记录染色体结构异常和数目异常细胞。 * 五、注意事项 低渗、固定要控制好时间 混匀沉淀时操作要轻 离心机注意配平 显微镜使用时切勿压碎 玻片和镜头，用完应用二甲苯擦净 实验报告书写 实验目的与原理 简要描述实验步骤 实验结果与分析，实验中出现的错误和需要改进的地方 问题：本实验中各个步骤需要注意什么并分析其原因？ * 良好的低渗 * * Thank you * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *