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PAGE PAGE 2 miR-17在细胞衰老中的表达变化 摘要: miRNA（全称microRNA，通用简称是miRNA，以下简称miRNA，miR-17是13号染色体长臂上的miRNA）是一种长约22个碱基的小RNA,近些年来miR-17被报道在许多肿瘤中表达上调。但miR-17在衰老细胞中的表达还没有报道。目的:本实验的目的是建立年轻和衰老的WI38细胞系,检测已知在多种肿瘤中高表达的miR-17细胞衰老中的表达情况。方法:通过传代培养细胞，细胞计数确定细胞代数，β-Gal染色检测细胞是否衰老。用Trizol试剂提取细胞的总RNA,逆转录获得cDNA模板。最后通过实时定量PCR比较miR-17在年轻和衰老细胞中的表达。结果:构建了年轻和衰老的WI38细胞系，发现与在肿瘤细胞中相反，衰老细胞中miR-17的表达水平显著降低。这一结果预示miR-17可能同时参与细胞衰老和肿瘤的发生发展。 一、综述 （一）细胞衰老 1.细胞衰老概述 衰老是一种有机体的死亡危险随年龄增加而增大的现象，是生命的基本现象，也是生物界的普遍规律。随着衰老研究及分子生物学的迅猛发展，人们对衰老的探究已经逐渐深入到细胞、基因及分子水平。 1961年，L.Hayflick做过这样的实验，体外培养的人体某种细胞，最多分裂50次左右就停止分裂了，并且丧失了正常的功能[1]。这种原来具有分裂能力的细胞随着整体年龄增长而减缓或停滞分裂的现象叫做细胞衰老。成纤维细胞WI38是研究细胞衰老的经典模型。 衰老细胞与年轻细胞相比，在形态结构和生理生化反应上会出现明显的变化，主要表现在膜透性及脆性增加，核膜内陷，核增大，核中染色质凝聚、破碎，线粒体数量减少，胞内脂褐素等异常物质沉积等。在pH=6时，衰老细胞的酸性β-半乳糖苷酶染色呈阳性。 2.细胞衰老的机制 从诱因来看衰老一般分为复制型衰老和过早型衰老两种，由于细胞分裂增殖进而端粒缩短或端粒机构的破坏而引起的人类和某些物种细胞的衰老称为复制型衰老，这是人类和某些物种细胞衰老的主要机理 ADDIN EN.CITE EndNoteCiteAuthorCristofalo/AuthorYear2004/YearRecNum52/RecNumrecordrec-number52/rec-numberref-type name=Journal Article17/ref-typecontributorsauthorsauthorCristofalo, V. J./authorauthorLorenzini, A./authorauthorAllen, R. G./authorauthorTorres, C./authorauthorTresini, M./author/authors/contributorsauth-addressThe Lankenau Institute for Medical Research, 100 Lancaster Avenue, Wynnewood, PA 19096, USA. cristofalov@/auth-addresstitlestitleReplicative senescence: a critical review/titlesecondary-titleMech Ageing Dev/secondary-titlealt-titleMechanisms of ageing and development/alt-title/titlesperiodicalfull-titleMech Ageing Dev/full-titleabbr-1Mechanisms of ageing and development/abbr-1/periodicalalt-periodicalfull-titleMech Ageing Dev/full-titleabbr-1Mechanisms of ageing and development/abbr-1/alt-periodicalpages827-48/pagesvolume125/volumenumber10-11/numberkeywordskeywordCell Aging/*physiology/keywordkeyword*Cell Proliferation/keywordkeywordCells, Cultured/keywordkeywordDNA Damage/physiology/keywordkeywordDNA Replication/*physiology/keywordkeywordGene Expression Regulation/*physiology/keywordkeywordHumans/key