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第九章 表观遗传学研究实验技术 简介 染色体免疫共沉淀技术 DNA甲基化分析技术 染色体免疫共沉淀技术 染色体免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation. ChIP)是基于体内分析发展起来的方法，也称结合位点分析法，可用于测定体内结合在特定DNA序列上的蛋白质。该方法主要应用于体内核小体定位、DNA甲基化、组蛋白修饰等方面的研究。 染色体免疫共沉淀技术 染色质免疫沉淀技术的原理是:在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起，超声破碎将染色质随机切断为一定长度范围内的染色质片段，用所要研究的目的蛋白特异性抗体沉淀交联复合体，再经过蛋白质与DNA解除偶联，纯化目的片段并检测。 ChIP技术的步骤 (1)细胞固定:在活细胞状态下，用甲醒固定蛋白质 DNA复合物，甲醒能有效地使体内的蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA产生交联。 其中使用甲醛作为交联剂的关键优势在于甲醒交联反应是完全可逆的，便于在后续步骤中分别对DNA和蛋白质进行分析。也可以使用紫外光作为交联剂来固定细胞，它比化学交联剂产生更少的干扰，但难以广泛应用。 ChIP技术的步骤 (2)化学(微球菌酶)或者超声破碎断裂染色质:通常采用超声波打断染色质，使其成一定大小的片段。目前一般认为500-1000bp的大小范围是比较合适的。 (3)染色质的免疫沉淀z利用目的