常见的梅毒检测.ppt.ppt

第四章 梅毒核酸检测 引物的选择： 梅毒螺旋体常规检测：一般使用扩增bmp、tpp47、polA等基因序列的引物。 梅毒螺旋体耐药基因检测：目前已知阿奇霉素耐药基因采用23S ribosomal RNA (rRNA) gene等基因序列的引物。 梅毒螺旋体基因分型研究：常用arp、tpr等基因序列的引物。 血清学非统计学方法室内质控 1 试剂盒内部质控品对照 用于判断每次实验的有效性，但不能作为室内质控品使用。 2 外部质控品对照 可采用商用质控品或自制质控品。质控品应包含阳性和阴性样品。非梅毒螺旋体试验阳性样品应有抗体滴度（一般为1:8）。 除下列情况：更换试剂批号、更换检测人员、更换试剂厂家等需做质量控制外，建议每个检测日检测一次阳性和阴性质控品。 血清学检测的统计学方法室内质控 Levey-Jennings质控图 “即刻法”质控 第六章 实验室质量管理 质量控制 血清学室内质控： 非统计学室内质量控制： 非梅毒螺旋体试验的RPR和TRUST、以及梅毒螺旋体试验的TPPA、TPHA、TP-RT、TP-WB等均采用肉眼直接阅读结果，其室内质量控制采用非统计学方法进行。 统计学室内质量控制： TP-ELISA、CLIA法等是通过临界值（Cut-off）判读结果，应采用统计学室内质量控制 室间质控 所有梅毒检测实验室每年应参加一次外部质量评价 * 谢 谢 * * * * * * 梅毒螺旋体抗原血清学试验原理 梅毒螺旋体特异蛋为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。 感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。 梅毒螺旋体抗原血清学试验方法 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB） TPPA/TPHA TPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶粒子为洋红色，在操作上也较为方便，出结果较快。 + Sheep red cell T.pallidum + Sensitised cell Sensitised cell Specific Antibody Hemagglutination TPPA(TPHA)试验原理示意图 TPPA试验检测流程 使用前将试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟。 在96孔U型板上编上相应的待检样本的编号。 按标签标明量在冻干的致敏粒子和未致敏粒子分别加入复溶液复溶，充分溶解后使用。 TPPA试验检测流程 定性实验每份标本做4孔，加标本稀释液至U型反应板，第1孔100μl，第2～4孔各25 μl。 用移液器取血清25 μl至第1孔，反复混匀后取25 μl至第2孔，连续倍比稀释至第4孔，最后1孔混匀后弃去25μl。 第3孔加未致敏粒子25 μl，第4孔加致敏粒子25 μl 将微量反应板置震荡器震荡30秒。 置微量反应板于有盖湿盒内，室温（15℃-30℃）静置2小时后，观察结果。 TPPA试验检测流程 结果报告: 观察第3孔，不出现凝集为有效试验 。 阳性：第3孔不出现凝集，第4孔出现1+～4+凝集反应。 阴性：第3、4孔均不产生凝集反应。 FTA-ABS试验 FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。其原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上用吸收剂1:5稀释过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。 FTA-ABS试验示意图及结果 TP—ELISA试验原理 TP—ELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。本法可用于大规模血清检测。 梅毒免疫层析快速检测方法 梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义 梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验，它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳性还是假阳性。 一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。 梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义 试验特异性强，很少出现假阳性。据统计，在普通人群中，有1%的生物学假阳性发生。 如系统性红斑狼疮患者血清可使FTA—ABS试验呈假阳性反