维生素C生产工艺的研究进展.docVIP

维生素C生产工艺的研究进展 　　图分类号：R9 文献标识码：A 文章编号：1006-1533(2007)12-0559-04? 　　 　　维生素C（Vitamin C,VC）主要存在于生物组织中，在新鲜水果、蔬菜和动物肝脏中的含量尤为丰富。VC的化学名称为L(+)-苏阿糖型-2,3,4,5,6-五羟基-2-己烯酸-4-内酯，分子式为C?6H?8O?6，分子量176.13。? 　　VC是一种人体必需的水溶性维生素，也是一种抗氧化剂，广泛应用于医药、食品、饲料、化妆品等诸多领域，具有广阔的市场前景。为了提高VC的质量和收率，国内外一直在对其生产工艺不断地进行改进。?? 　　 　　1 莱氏法? 　　 　　莱氏法是1933年德国化学家Reichstein等发明的最早应用于工业生产VC的方法。该法以葡萄糖为原料，经催化加氢制取D-山梨醇，然后用醋酸菌发酵生成L-山梨糖，再经酮化和化学氧化，水解后得到2-酮基-L-古洛糖酸（2-KLG），再经盐酸酸化得到VC。莱氏法生产的VC产品质量好、收率高。由于生产原料廉价易得，中间产物的化学性质稳定，至今仍是许多国外VC生产商，如Roche公司、BASF/ Takeda 公司和E.Merck公司等厂商采用的主要工艺方法。但是莱氏法也存在不少缺陷，诸如生产工序多、劳动强度较大，使用大量有毒、易燃化学药品，容易造成环境污染等。为此，自20世纪60年代起，各国学者一直致力于莱氏法的改进。?? 　　 　　2 二步发酵法? 　　 　　20世纪70年代初，中国科学院微生物研究所和北京制药厂合作，研制成功了“二步发酵法” 制备VC的新工艺［1］。该法以生物氧化过程代替莱氏路线中的部分纯化过程，简化了生产工艺，降低了生产成本，减少了“三废”污染，多年以来一直被国内厂家使用。二步发酵法生产VC可以分为发酵、提取和转化三大步骤，即D-山梨醇先经细菌氧化为L-山梨糖，再通过细菌发酵生成VC前体2-KLG，最后用化学法将2-KLG转化为VC。在几十年的工艺发展中，二步发酵法工艺不断地得到了改进。? 　　2.1 发酵工艺? 　　二步发酵法的生物转化过程如下： 　　 　　2－KLG 　　其中，D-山梨醇转化为L-山梨糖是由黑醋酸菌完成的，该工艺在莱氏法中就已使用，由于工艺成熟且生物转化率高（98％以上），因此在二步发酵法中得以延用。近年来，国内外对这项工艺的研究甚少，研究方向主要集中在二步发酵法的第二步，即由L-山梨糖转化为2-KLG。该步为混菌发酵，目前其代谢机制尚不清楚，也未得到相关基因。自二步发酵法发明推广以来，国内外对该步的研究［2］除了优化发酵工艺外，主要集中在大、小菌的关系和优良菌株的选育方面。? 　　VC工业生产常用的小菌为氧化葡萄糖酸杆菌，大菌为巨大芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌或条纹假单孢杆菌。焦迎晖等［3］通过分析VC二步发酵过程中活菌数、产酸量、pH值和糖酸转化活力等，进一步证实了小菌具有将L-山梨糖转化为2-KLG的能力，而大菌本身不产酸，其作用仅仅是通过刺激小菌的生长而促进小菌产酸。冯树等［4］研究发现大菌的胞外液还具有促进小菌转化L-山梨糖生成2-KLG的作用，具有该作用的组分的分子量包括30 - 50 kD和大于100 kD两部分，其中前者是一种含铁和锌的蛋白质。? 　　刘祯等［5］发现一株葡萄糖酸杆菌正向突变株，该菌株前期生长及产酸明显高于生产菌株201C，经流加发酵工艺培养，可缩短发酵周期8 h，山梨糖生成2-KLG的摩尔转化率达80％。陈建华等［6］用配对法筛选得到氧化葡萄糖酸杆菌10-3的优良伴生菌短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）97002，混合菌发酵生产2-KLG，山梨糖的转化率达90％。? 　　2.2 提取工艺? 　　二步发酵法两次发酵以后,发酵液中仅含8 %左右的2 - KLG，而残留菌丝体、蛋白质、多糖或悬浮微粒等杂质的含量却很高。这给2-KLG的分离提纯带来了很大困难，致使后处理费用占总成本的比例较大。目前，VC工业生产中常用的2-KLG的分离提纯方法有加热沉淀法、化学凝聚法和超滤法。? 　　2.2.1 加热沉淀法? 　　加热沉淀法是2-KLG分离提纯的传统工艺，分离手段较为落后。此工艺通用氢型树脂，调pH至蛋白质的等电点后加热除蛋白。采用此工艺会造成有效成分在高温下降解损失，且发酵液直接通过树脂柱，造成树脂表面污染，降低树脂的交换容量和收率。两次通过树脂柱带进了大量水分，也增大了浓缩耗能。? 　　2.2.2 化学凝聚法? 　　化学凝聚法是通过加入化学絮凝剂来除去蛋白质、菌体、色素等杂质，避免了加热沉淀时有效成分的损失。季光辉等［7］采用化学凝聚法对VC发酵液进行预处理，使2-KLG的滤液质量提高，提取前步收率提高5.2