菜豆组培快繁技术的研究.docVIP

菜豆组培快繁技术的研究 　　摘 要：以双丰3号菜豆为试验材料，比较了种子消毒方法，筛选了快繁最佳增殖培养基、生根培养基及移栽基质。结果表明，25%次氯酸钠浸泡20 min对菜豆种子消毒效果最好；最佳增殖培养基为MSB5+6-BA 5.0 mg/L，14 d获得再生芽为9.2个/外植体；最佳生根培养基为1/2 MSB5+IBA 0.1 mg/L，生根率达95.3%；最佳移栽基质为草炭∶蘑菇渣=1∶1，移栽成活率为97%。 　　关键词：菜豆；消毒；增殖；生根；移栽 　　菜豆（Phaseolus vulgaris L.）又称四季豆、芸豆、扁豆等，分为食豆和食荚两种类型，菜豆在我国各省市均有栽培，种植范围十分广泛，是我国重要的粮食作物和蔬菜作物。菜豆能为人类提供丰富的蛋白质、碳水化合物、维生素及矿物质等[1]，其嫩荚尤其是人们喜食的蔬菜之一。 　　植物组织培养技术已在许多作物上得到应用，并对农业生产起到巨大的推动作用，但关于菜豆组织培养技术的报道却相对较少[2]，主要是由于菜豆组织的再生能力较弱，组织培养难度较大。因此，本试验对菜豆组培快繁技术做了初步研究，为菜豆种质资源保存、种质资源创新、脱毒技术应用、遗传转化以及优良品种快繁等工作提供可以利用的技术平台。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料及时间、地点 　　供试材料为双丰3号（天津科润蔬菜研究所提供），试验于2012年1月至2014年6月在天津科润蔬菜研究所组培实验室完成。 　　1.2 种子消毒 　　挑选籽粒均匀一致的菜豆种子，放置于玻璃容器内。采用如下4种常见豆类种子消毒方法，并作适当改动。T1：70%乙醇处理3 min，无菌水冲洗3次，25%次氯酸钠溶液浸泡20 min，无菌水洗涤5～6次[3]；T2：25%次氯酸钠处理20 min，无菌水洗涤5～6次[4]；T3：氯气熏蒸6 h[5]；T4：氯气熏蒸12 h[6]。 　　将处理种子的种脐向下接种于萌发培养基（MS[7]+6-BA 0.5 mg/L）中，密封好后放置于培养室中培养，每个处理50粒种子，3次重复，共600粒种子。培养室环境温度为25℃，光照强度为4 000 lx，光周期为16 h光照/8 h黑暗。培养5～6 d即可长出幼苗，供试验备用。 　　1.3 增殖培养 　　在超净工作台上，取生长5～6 d的2叶1心的无菌苗，放置于灭菌后的培养皿中，切掉胚根及2片真叶，保留叶柄，作为外植体备用。将处理好的外植体的下胚轴部分插入增殖培养基中，插入深度0.5 cm左右。增殖培养基为MSB5（将MS培养基中的有机成分换成B5培养基的有机成分，其他成分不变，缩写为MSB5）加入不同浓度的6-BA，最终培养基中6-BA浓度分别为0.5、1.0、3.0、5.0 mg/L，每个培养瓶中3个外植体，每个处理10瓶，3次重复，共120瓶。将密封好的培养瓶放置于培养室中培养，培养条件同上。 　　培养7 d后，再生芽长到2～3 cm切一次，记录再生芽数量；将外植体置于相同培养基中继续培养，14 d后切第二次，记录再生芽数量，最后统计两次再生芽数量，筛选最佳快繁培养基。 　　1.4 再生芽的生根 　　切取通过快繁获得的均匀一致的再生植株，插入含有不同浓度IBA的培养基中，基本培养基为1/2 MSB5，IBA浓度分别为0、0.1，0.3、0.5、0.7、1.0 mg/L，每个培养瓶接种再生芽10个，每个处理5瓶，3次重复，共90瓶。10 d后测生根率和生根数量，生根率和生根数量最多的培养基为最佳生根培养基。 　　1.5 组培苗的移栽 　　先将生根后的组培苗开盖炼苗3～4 d，后将组培苗连瓶一起放置温室内炼苗3～4 d，炼苗结束后将组培苗取出，在水中除掉根部的培养基，尽量使再生根完整。将完整的组培苗移栽到含有不同比例基质的营养钵中，基质处理分为6种，分别为100%草炭、蛭石、蘑菇渣、草炭+蛭石（1∶1）、草炭+蘑菇渣（1∶1）、蘑菇渣+蛭石（1∶1），每个处理移栽30株组培苗，移栽完的营养钵放置在有塑料薄膜覆盖的小拱棚内，移栽后前3 d适当向拱棚内喷水，保证拱棚内相对湿度达100%，3 d后逐渐放风直至除掉拱棚，10 d后调查成活率。 　　2 结果与分析 　　2.1 种子消毒方法的筛选 　　由表1可知，将4种消毒方法处理后的种子均无污染，可见4种方法均有较好的消毒效果，但对种子出芽率影响有很大差别。T2处理对发芽率影响最小，该处理下种子发芽率极显著高于其他3个处理，T4处理对种子芽率影响最大，发芽率仅4%，极显著低于其他3个处理。T3、T4均为氯气熏蒸消毒，氯气熏蒸是最近大豆种子消毒采用的方法，用其消毒对菜豆种子伤害较大。本试验结果表明，氯气不适用于菜豆种子消毒，而采用次氯酸钠消毒最佳。 　　2.2 增殖