谷氨酸棒杆菌天冬氨酸激酶G359D突变解除赖氨酸与苏氨酸协同抑制.PDF

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2017, 33 11 :143-152 谷氨酸棒杆菌天冬氨酸激酶 G359D 突变解除赖氨酸与 苏氨酸协同抑制的研究 1，2 2 2 2 1 徐德雨   郑小梅  赵晶  郑平  赵树欣  （1. 天津科技大学生物工程学院，天津 300457 ；2. 中国科学院系统微生物工程重点实验室，天津 300308） 摘 要 ： 天冬氨酸激酶 （Aspartate Kinase，AK）是赖氨酸合成途径中关键酶，其受到代谢产物赖氨酸与苏氨酸的协同抑制， 旨在发现其解除协同抑制的新突变体并解析其机理。通过对赖氨酸高产菌Corynebacterium glutamicum ZL5 与野生型C. glutamicum ATCC 13032 的天冬氨酸激酶氨基酸序列比对，发现在高产菌的天冬氨酸激酶中存在G359D 突变。通过体外天冬氨酸激酶野生型和 G359D 突变体酶活检测，发现该G359D 突变体在10 mmol/L 赖氨酸和苏氨酸同时存在时仍保留了76.94%±1.61% 的酶活，而野生 酶的酶活仅残留4.38%±1.28%。这一结果在赖氨酸高产菌谷氨酸棒杆菌的回复突变中也可得到验证，其回复突变后使赖氨酸产量 下降15.57%。通过同源建模和结构分析发现，与野生酶相比，G359D 突变体结合赖氨酸后，其位于活性中心附近的Arg151 与Glu74 之间无法形成离子键，允许底物分子的结合而具有较高活性。发现天冬氨酸激酶G359D 突变体可阻断赖氨酸引起的别构效应，从 而有效解除赖氨酸与苏氨酸的协同抑制。 关键词 ： 谷氨酸棒杆菌 ；天冬氨酸激酶 ；赖氨酸 ；苏氨酸；协同抑制 DOI ：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0387 Aspartokinase G359D from Corynebacterium glutamicum Relieves the Synergistic Inhibition of Lysine and Threonine 1，2 2 2 2 1 XU De-yu ZHENG Xiao-mei ZHAO Jing ZHENG Ping ZHAO Shu-xin （1. College of Biotechnology ，Tianjin University of Science and Technology ，Tianjin 300457 ；2. Tianjin Institute of Industrial Biotechnology ， Chinese Academy of Sciences ，Tianjin 300308 ） Abstract: Aspartokinase（AK）is a key enzyme involved in the lysine biosynthesis，but its activity is synergistically inhibited by end-products such as lysine and threonine. This study focuses on finding new m