结缔组织多色染色法胶原纤维染色法网状纤维染色法弹力纤.PDF

生物帮—生物技术，生命科学的门户网站 各种组织染色方法大全 主要内容： 结缔组织多色染色法 胶原纤维染色法 网状纤维染色法 弹力纤维染色法 第一节 结缔组织多色染色法 一、Mallory 三色染色法 1. 试剂配制 （1）重铬酸钾液 重铬酸钾2.5g，醋酸5ml，蒸馏水95ml （2）苯胺蓝桔黄G 液 苯胺蓝0.5g，桔黄G2g，磷钨酸1g， 蒸馏水 100ml （3）酸性复红液 酸性复红0.5g，蒸馏水100ml 2.染色步骤 （1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。 （2）重铬酸钾液10min。 （3）蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2 次。 （4 ）酸性复红液2min，蒸馏稍洗。 （5）苯胺蓝液20min，95%乙醇快速分化。 （6）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 3.结果 1 生物帮—生物技术，生命科学的门户网站 胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色， 神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红 色。 4.注意事项 （1）酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红 色。 （2）苯胺蓝液染色后，用95%乙醇分化时，须用显微镜观察 掌握。 （3）对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。 （4 ）另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织 成分。 二、Masson 三色染色法 1.试剂配制 （1）Masson 复合染色液 酸性复红 1g，丽春红2g，桔黄 G2g，0.25%醋酸300ml。 （2）亮绿染色液 高绿SF0.1g，0.2%醋酸 100ml。 2.染色步骤 中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。 （1）Masson 复合染色液5min。 （2）0.2%醋酸水溶液稍洗。 （3）5%磷钨酸5-10min。 （4 ）0.2%醋酸水溶液浸洗2 次。 2 生物帮—生物技术，生命科学的门户网站 （5）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2 次。 （6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 3.结果 胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。 4.注意事项 （1）Masson 复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制 肌纤维清晰为止。 （2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的 效果。 三、显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法（1993 年） 1.试剂配制 （1）高锰酸钾硫酸液 0.5%高锰酸钾水溶液中加入5ml 的硫 酸。 （2）维多利亚蓝染色液 维多利亚蓝2g，糊精0.5g，间苯二 酚4g，蒸馏水200ml。将上述物质混合后加热煮沸，边煮边 搅拌，约5min。然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml， 另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中继续煮沸3min，不断 搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸 放在60℃恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再溶 于400ml 的70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml 和苯酚5g 放置至成熟后使用。 3 生物帮—生物技术，生命科学的门户网站 （3）丽春红染色S 染色液 0.5%丽春红S 水溶液 15ml，苦 味酸饱和水溶液85ml 。 （4 ）Gomori 氨性银改良液 取5%硝酸银水溶液5ml，滴加 浓氨水由棕黑色变清为止，再加入 3%氢氧化钠水溶液 5ml， 此时该液突变紫黑色，这时再加入氨水使之变清晰为止。最后 用蒸馏水补足至50ml，盛棕色试剂瓶中，置于冰箱中备用较 长时间。 2.染色步骤 （1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。 （2）高锰酸钾硫酸液氧化3min 后，自来水浸洗后，用2% 草酸漂白2min。 （3）5%硫酸铁铵 1min。 （4 ）Gomori 氨性银改良液染 1min。