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食品中脱氢乙酸检测的方法的研究进展 　　摘要：脱氢乙酸（DHA）是一种高效的防腐、防霉剂，在酸、碱条件下均有一定的抑菌能力，尤其对酵母、细菌、霉菌有较强的抑制能力，常用于果汁、酱菜、糕点、淀粉制品、肉制品、发酵豆制品、复合调味料等食品和食品添加剂防腐、防霉。但因其毒性及对人体健康的危害，对其含量的检测日益受到人们的重视。本文针对DHA的多种检测方法进行阐述，旨在为DHA的检测研发提供一定的参考。 　　关键词：脱氢乙酸 检测 气相色谱 液相色谱 气相色谱质谱联用 　　脱氢乙酸学名3-乙酰基-6-甲基-脱（2）氢吡喃-2，4脱（3）氢二酮，是继苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸酯类之后又一代新的广谱食品防腐防霉剂，它基本不受pH的影响，抑菌能力很强，尤其对酵母、细菌、霉菌有较强的抑制能力，常用于果汁、酱菜、糕点、淀粉制品、肉制品、发酵豆制品、复合调味料等食品和食品添加剂防腐、防霉。工业上还用于饲料、日用化妆品、纤维制品、医药以及齿科材料的防腐。但是脱氢乙酸半数至死量大鼠口服为1000mg/kg体重，大量食用脱氢乙酸对人体健康将产生严重的危害。许多国家对脱氢乙酸在食品中的使用量都有明确的规定：日本规定其在食品中添加量不得超过0.5g/kg；美国规定其在食品中最高残留限量为65mg/kg。我国《GB 2760-2011 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中规定：脱氢乙酸可用于果汁、酱菜、糕点、淀粉制品、肉制品、发酵豆制品等几类食品，最大使用量为0.3～1.0mg/kg。因而，准确地测定食品中脱氢乙酸的含量，有利于指导企业生产，规范企业行为；同时也有利于维护消费者权益，减少不良危害。 　　检测食品中脱氢乙酸的国标方法有气相色谱法、液相色谱法等，方法各有优缺点。本实验在多种样品前处理方法上进行改进，并相对应建立有效的气相色谱、液相色谱、气相色谱质谱联用等检测方法，为今后食品中脱氢乙酸的检测研发提供一定的参考。 　　1、气相色谱法 　　该方法是在GB/T 5009.121-2003《食品中脱氢乙酸的测定》标准方法上进行改进：将样品酸化后，用乙醚提取脱氢乙酸后浓缩，用气相色谱（附氢火焰离子化检测器）进行分离测定，与标准系列比较定量。 　　1.1实验部分 　　1.1.1仪器与主要试剂 　　气相色谱仪：GC-2010（附氢火焰离子化检测器 FID），日本岛津公司。 　　脱氢乙酸标准品：纯度≥99.6%，购自美国。 　　乙醚：色谱纯，重蒸。 　　丙酮：色谱纯，重蒸。 　　脱氢乙酸标准工作溶液：准确称取脱氢乙酸标准品50mg，以丙酮溶解定容于50mL容量瓶中，再以丙酮分别稀释至1μg/mL、10μg/mL、40μg/mL、80μg/mL 120μg/mL、160μg/mL 200μg/mL，配制标准工作溶液。 　　色谱条件： 　　色谱柱：DB-5毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）； 　　分流比：10：1，柱流速1.0mL/min 　　进样口温度：250℃、检测器温度：300℃、柱温165℃； 　　气流条件：氢气50mL/min、空气400mL/min、氮气40mL/min。 　　应用上述色谱条件，脱氢乙酸标准品溶液进样，色谱图如下： 　　1.1.1样品处理 　　称取5～10g试样（准确至0.0001g），加10mL饱和氯化钠溶液，2mL盐酸溶液（1+1）酸化，分别以50mL、20mL、20mL乙醚提取三次，合并乙醚层于100mL容量瓶中定容后，分别用20mL饱和氯化钠溶液、50mL碳酸氢钠溶液（10g/L）各洗涤一次，加10g无水硫酸钠，室温下放置30min，取50mL在60℃水浴下用旋转蒸发仪浓缩至近干，用丙酮定容后供气相色谱测定。 　　1.1方法讨论 　　1.1.1色谱条件的选择 　　脱氢乙酸用气相色谱法测定，与其他同类功能的防腐剂如山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸酯类都有很好的分离度，且在非极性柱、弱极性柱和极性柱中都有很好的响应值。但在实验显示，脱氢乙酸在非极性柱中因低柱温有色谱峰拖尾现象，在极性柱中因柱流失有基线漂移现象，为使定性定量准确，选用了弱极性柱DB-5。 　　1.1.1线性关系 　　在本实验条件下，脱氢乙酸标准工作液在0.5～100μg/mL范围内与响应值峰面积有良好的线性关系，相关系数r=0.99995。脱氢乙酸的最低检出浓度为0.2μg/mL。 　　1.1.1准确度与精密度 　　选用含脱氢乙酸的辣椒酱样品，在样品中添加不同浓度的脱氢乙酸标液，按本方法测定，每一浓度重复测定6次，取平均值，计算平均回收率及变异系数，结果见下表。实验结果显示，本方法回收率满意，相对标准偏差范围小于10%，重复性好，符合检测要求。 　　加标浓度（mg/kg） 平均回收 　　率（%）