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绿豆叶斑病菌分生孢子的产生和萌发条件研究-农学论文 绿豆叶斑病菌分生孢子的产生和萌发条件研究 张海涛，殷丽华，柯希望，台莲梅，左豫虎 （黑龙江八一农垦大学农学院，黑龙江大庆163319） 摘要：为了明确绿豆叶斑病病原菌变灰尾孢菌(Cercospora canescens)分生孢子形成及萌发的最适条件，研究了变灰尾孢菌在9 种供试培养基上，在不同培养条件下分生孢子的产生及分生孢子的萌发情况。结果表明，在高粱粒培养基上25℃，光暗交替条件下培养10 天后即可产孢，培养14 天后产孢量可达9×105个/mL，玉米粉培养基和小麦粒培养基产孢较少，其他培养基不产孢。分生孢子在25℃、pH 6~7、连续黑暗条件下无菌水中培养20 h 后萌发率可达76.0%，不同温度、不同光照处理间萌发率差异显著。在蔗糖溶液和蛋白胨溶液中培养20 h 后萌发率分别达87.0%和86.3%。变灰尾孢菌的最适产孢条件为高粱粒培养基上25℃光暗交替培养；分生孢子最适萌发条件为25℃、pH 6~7、连续黑暗培养，蔗糖和蛋白胨可适当提高分生孢子的萌发率。 关键词：绿豆叶斑病；变灰尾孢菌；产孢量；产孢条件；萌发条件 中图分类号：S432.4+4，S435.22 文献标志码：A 论文编号：cja 0 引言 绿豆作为中国主要的杂豆作物，近年来在黑龙江省的种植面积逐年增加，但因相对落后的生产技术及较为粗放的管理方式，近年来绿豆病害问题呈逐年加重的趋势。由变灰尾孢菌(Cercospora canescens)引起的绿豆叶斑病，又称红斑病，是中国及亚洲绿豆生产上危害最为严重的病害之一[1]。在中国安徽、河南、河北、陕西等省发病较重[2]。绿豆叶斑病以开花结荚期危害最重，病情严重时，病斑融合成片，造成叶片干枯，严重影响绿豆的产量，轻者减产20%~50%，严重的可减产90%以上。 尾孢菌属的绝大多数种在正常培养时不产生分生孢子，例如，要获得引起大豆紫斑病的菊池尾孢(Cercospora kikuchii Mats. Tomoy)的大量分生孢子，需用高粱米做培养基，在温箱内黑白灯照射处理才能获得[3]。薛其勤等[4]发现花生褐斑病菌也较难产孢，病菌被黑光灯照射培养20 天后的产孢量仅能达到1.80×103个/mL。杨建清等[5]测定烟草疫霉4 天就可产生大量游动孢子，庒义庆等[6]研究发现蕉斑镰刀菌3 天后就有大量的分生孢子产生。但尾孢菌与其他真菌不同，其产孢时间较长，而长时间的培养容易造成污染，影响后续试验的顺利进行。因此，对绿豆叶斑病菌的最适产孢培养基、产孢条件及分生孢子萌发条件的研究，是快速获得大量病菌分生孢子的重要前期基础，对深入开展绿豆-变灰尾孢菌互作的相关研究有非常重要的科学意义。 国内外对该病的研究报道较少，多数报道与该病害的田间防治有关，1989 年郭继红等[7]的研究表明，灭病威对绿豆叶斑病的防治效果显著。2012 年邢宝龙[8]认为药剂防治应选用25%嘧菌酯悬浮剂500 倍液浸种2 h+25%嘧菌酯悬浮剂600 倍液喷雾进行防治。在病原菌分离与鉴定方面也有相关的研究报道，1987 年李怡琳等[2]对绿豆叶斑病的病原菌进行了分离和鉴定，从形态学上确定了其病原菌为变灰尾孢菌(Cercosporacanescens)。2015 年刘昌艳等[9]对绿豆叶斑病菌进行形态学和分子特征鉴定，从分子角度确定绿豆叶斑病的病原为变灰尾孢菌。2014 年金玉晓等[10]对采集的绿豆叶斑病病叶进行了病原菌分离、鉴定及其菌丝生长特性的研究，发现变灰尾孢菌在PDA、PSA上生长较快，但未就分生孢子的形成开展相关实验。李怡琳等[2]对病原菌的产孢方法进行了研究，认为变灰尾孢菌接种在高粱粒培养基上后，放入搪瓷盘中其上覆盖双层消毒纱布防止污染，光暗交替培养2 周，然后自然干燥，装入双层塑料袋中用硅胶除湿的方法可以使其大量产孢。但其操作方法步骤较多，过程中容易造成污染，不利于孢子的获得。且对于该病菌分生孢子萌发条件研究至今仍未见报道。孢子的获得是研究病菌侵染特性、致病机制乃至发生流行规律的重要前提，而在常规的马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上培养变灰尾孢菌并不能很好的诱导其产孢，因此，为深入研究绿豆-变灰尾孢菌的互作机制，本研究对变灰尾孢菌的最适产孢培养基、最适产孢条件以及最适的孢子萌发条件进行了系统探讨，为绿豆资源的抗病性鉴定，明确病菌侵染过程等奠定基础。 1 材料和方法 1.1 供试菌株 供试菌株为金玉晓等[3]从采自大庆市林甸县的绿豆叶斑病标样上分离得到的纯培养LD 14-08，由黑龙江八一农垦大学植物免疫研究室提供。