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高山杜鹃组织培养快速繁殖技术的研究
高山杜鹃组织培养快速繁殖技术的研究
摘要 以比利时高山杜鹃茎段和叶片为外殖体进行诱导试验,显示茎外植体诱导丛生芽效果好。分别比较了不同激素对外殖体诱导、丛生芽增殖及组培苗生根试验的效果,表明:相对较优的芽诱导培养基为1/4MS0+ZT 2.0mg/L+IAA 0.5mg/L;继代增殖培养基为1/4 MS0+ZT 0.5~1.0mg/L+IAA 0.5mg/L+GA31.0mg/L;壮苗生根培养基为1/2MS+蔗糖20g/L+活性碳2g/L+IBA 0.5mg/L,移栽成活率80%以上。
关键词 高山杜鹃;组织培养;快速繁殖;技术研究
中图分类号 S685.2104+.3文献标识码A文章编号1007-5739(2008)17-0013-02
高山杜鹃为杜鹃花科杜鹃花属植物,高山常绿灌木或小乔木,生长在海拔2 500~4 000m山地阴坡的冷杉林中或林缘草坡上。高山杜鹃花形多种多样,色彩艳丽,颇具观赏价值,已成为木本花卉中重要的一族,在园林上占有重要的地位。近年来我国每年均有批量进口高山杜鹃,成品花价格特别高,且枝粗叶芽少,对扦插育苗和嫁接育苗均不利,成活率低,费用高。为了在短时间内繁殖出大批量的高山杜鹃苗木,我们对其进行了组培快繁技术研究和探讨,建立了高山杜鹃的组培再生体系。该体系的建立对高山杜鹃种苗快速繁殖和规模化生产有着重要的指导意义。
1材料与方法
供试材料为比利时引进的盆栽高山杜鹃。
1.1无菌外殖体材料的获得
选取当年生、长势好的高山杜鹃嫩枝,将所取材料先用流水冲洗干净,接着在加有适量洗衣粉的水中浸泡10min,再用流水冲洗干净,然后在超净工作台上用70%酒精消毒10s,取出用无菌水冲洗2次,再用0.1%升汞溶液消毒茎段和茎尖8min,消毒后用无菌水?_洗4~6次,并用无菌滤纸吸去表面水分。将消毒好的茎尖和茎段端部切去,接种在琼脂固化的1/4MS0[1](大量元素CaCl2改为Ca(NO3)2)+IAA 0.2mg/L+水解酪蛋白500mg/L培养基上生长,30d后,腋芽萌发可长到2~3cm,将萌发的无菌小芽苗叶片切成1cm2见方的小块,茎段切成1cm长的切段作外殖体。
1.2培养条件
培养温度为(25±2)℃,每天12~14h光照,光照强度为1 500~2 500Lx。
1.3培养基
在选择基本培养基的基础上,以改良的1/4MS0为基本培养基,附加3%蔗糖及0.6%琼脂,灭菌前pH值调至5.5,按不同的培养目标添加相应的激素,配制成诱导分化、继代增殖、生根成苗培养基,常规方法灭菌。
2结果与分析
2.1不同细胞分裂素对高山杜鹃丛芽诱导的影响
为了寻找适合高山杜鹃丛生芽诱导的培养基,设计了5组配方处理(见表1)。每个处理接种10瓶,每瓶接5个外植体,将叶片和茎段接种在含不同激素配比下的分化培养基中培养,培养45d后统计试验结果。不同的细胞分裂素对高山杜鹃丛生芽诱导能力不同,玉米素ZT具有较强的诱导分化能力,这与陈钟宇等人的研究结果一致[2-4],BA 和激动素KT未出现芽分化。试 验还观察到茎段的诱导效果好,叶片未能诱导出不定芽。其中,激素组合1(ZT 2.0mg/L+IAA 0.5 mg/L)具有较强的诱导不定芽发生的能力,单个外殖体最多可以分化出10个芽,平均达4~6个。而组合5(KT 1.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L)能诱导出大量胚性愈伤,继代后可观察到胚状体的发生。试验结果表明,高山杜鹃相对理想的丛生芽诱导培养基为1/4MS0+ZT 2.0mg/L+IAA 0.5mg/L,诱导率为84%。
2.2不同细胞分裂素对高山杜鹃丛生芽增殖的影响
丛生芽在诱导培养基中培养25~30d后,形成非常密集的丛生芽而影响芽的生长。为了使芽得到更好地生长,在无菌条件下将丛生芽分割成1cm2小块,然后接种到不同细胞分裂素的继代培养基上进行继代培养。培养30d后统计株高大于2cm的苗数。由于细胞分裂素的持续作用,增殖培养基中的不定芽不断分化和生长形成芽丛。由表2可知,在选用的3种细胞分裂素中,ZT的效果最好,在供试浓度范围内,随着ZT浓度的升高,丛生芽增殖倍数也相应提高。当ZT浓度为2.0mg/L时,增殖倍数最高达9倍,但苗较细弱。综合考虑增殖倍数和小苗发育情况,认为处理组合3丛生芽增殖率较适宜,1/4MS0+ZT 0.5~1.0mg/L+IAA 0.5mg/L是理想的增殖培养基。
2.3生根培养结果
生根阶段,为了使生根苗生长健壮,尽快地适应大田环境,要适当增加光照强度,一般控制在3 000~5 000Lx[5]。将继代培养基上形成的粗壮芽(2~3cm)分株切割,扦插于
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